[发明专利]免疫磁珠分选去除分化体系中胚胎干细胞的方法

摘要

本发明公开了一种免疫磁珠分选去除分化体系中胚胎干细胞的方法，属于医学生物技术领域。本发明包括如下步骤：(1)制备单细胞悬液；(2)MACS分离纯化分化细胞：按1∶100的稀释比例加入小鼠抗小鼠SSEA－1 IgM抗体，使总体积为500μl，4℃孵育10min；用2ml MACS缓冲液洗涤细胞两次离心，去除多余的抗体；用80μl MACS缓冲液重悬细胞，加入包被羊抗小鼠IgM抗体的免疫磁珠20μl，4℃放置15min；加入MACS缓冲液洗涤离心，弃上清，重新用500μl缓冲液重悬细胞；2ml缓冲液预洗LD柱后，将500μl细胞悬液过柱；1ml缓冲液洗柱两次，去除非标记阴性细胞；移柱出磁场，用缓冲液洗柱，收集洗液即为阳性细胞。本发明的优点是：操作简便快速，无须昂贵的实验设备，纯度较高，分筛后的细胞存活率高。

主权项

1.免疫磁珠分选胚胎干细胞分化细胞中原始细胞的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)制备单细胞悬液：取培养的胚胎干细胞分化期细胞，用0.25％Trypsin-EDTA消化2-4min，加血清终止消化，打散后离心，弃上清；用MACS缓冲液重悬细胞，过40μm滤网获得单细胞悬液，调整细胞密度至107/ml；(2)MACS分离纯化分化细胞：按1∶100的稀释比例加入小鼠抗小鼠SSEA-1IgM抗体，使总体积为500μl，4℃孵育10min；用2ml MACS缓冲液洗涤细胞两次离心，去除多余的抗体；用80μl MACS缓冲液重悬细胞，加入包被羊抗小鼠IgM抗体的免疫磁珠20μl，4℃放置15min；加入MACS缓冲液洗涤离心，弃上清，重新用500μl缓冲液重悬细胞；2ml缓冲液预洗LD柱后，将500μl细胞悬液过柱；1ml MACS缓冲液洗柱两次，去除非标记阴性细胞；移柱出磁场，用缓冲液洗柱，收集洗液即为阳性细胞。