[发明专利]轮状病毒Vp4全基因与乳酸菌非抗性表达载体的重组与表达

摘要

一种轮状病毒Vp4全基因与乳酸菌非抗性表达载体的重组与表达，属于生物基因领域，其特征是：对重组质粒pGEM－T－Vp4和以thyA基因为选择压力的载体pW425t均以SalI、KpnI双酶切，切胶纯化后，以T4 DNA连接酶连接；连接产物转化至thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态E.coli X13中，在普通的LB固体培养基上培养，经生长功能弥补，筛选获得原核重组表达质粒pW425t－Vp4；其有益效果是：将猪A组轮状病毒Vp4全基因进行克隆、测序，与“疫苗级”以thyA基因为选择标记的可在乳酸菌和大肠杆菌之间穿梭表达的载体pW425t进行重组，通过检测，表明外源基因Vp4可以通过表达载体pW425t在大肠杆菌中表达并具有反应原性，为下一步在thyA基因缺陷型的乳酸菌受体菌株中表达提供理论基础和实验依据。

主权项

l、一种轮状病毒Vp4全基因与乳酸菌非抗性表达载体的重组与表达，其特征是：轮状病毒Vp4全基因与乳酸菌非抗性表达载体的重组是：从培养的RV中用反转录聚合酶链式反应RT-PCR技术扩增Vp4全基因，开放阅读框含2331bp，编码776个氨基酸，通过T-A克隆技术，将PCR产物克隆至克隆载体pGEM-T载体中，获得重组克隆质粒pGEM-T-Vp4；对重组质粒pGEM-T-Vp4和以thyA基因为选择压力的非抗生素抗性的可以在乳酸菌和大肠杆菌之间穿梭表达的质粒载体pW425t均以SalI、KpnI双酶切，切胶纯化后，以T4 DNA连接酶连接；连接产物转化至thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态E.coli X13中，在普通的LB固体培养基(没有添加胸腺嘧啶)上培养，经生长功能弥补，筛选获得原核重组表达质粒pW425t-Vp4；轮状病毒Vp4全基因与乳酸菌非抗性表达载体的表达是：将阳性菌用苏氨酸诱导表达，pW425t-Vp4经SDS-PAGE电泳分析显示，重组质粒获得高效表达，融合蛋白的相对分子量约为87.67kD。