[发明专利]哺乳动物细胞无载体固定化培养方法无效
| 申请号： | 200410091775.0 | 申请日： | 2004-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN1778901A | 公开（公告）日： | 2006-05-31 |
| 发明（设计）人： | 陈昭烈;刘兴茂;刘红;吴本传;叶玲玲;倪小平;王启伟;于蕊 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 |
| 主分类号： | C12N5/06 | 分类号： | C12N5/06 |
| 代理公司： | 北京北新智诚知识产权代理有限公司 | 代理人： | 张爱群 |
| 地址： | 100071*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种哺乳动物细胞无载体固定化培养方法，包括以下步骤：(1)促使哺乳动物细胞在悬浮培养条件下形成细胞团(2)控制细胞团的平均粒径(3)利用细胞团的自然沉降和旋转过滤器截流细胞团，更换培养基或连续灌注培养基(4)使细胞团松散、解聚(5)使自细胞团解聚的游离细胞再形成细胞团，放大培养规模。本发明的优点在于：①悬浮培养体系中所形成细胞团的形状规则、大小较均一，细胞团的平均粒径控制在小于300μm的范围内②细胞团解聚、游离细胞再集聚成团的条件温和、可控③哺乳动物细胞培养的活细胞密度≥1×107ells/ml、细胞活力≥90％④可节省购买多孔微载体的动物细胞培养成本⑤便于监测培养过程中的细胞生长，细胞培养规模放大容易。 | ||
| 搜索关键词： | 哺乳动物 细胞 载体 固定 培养 方法 | ||
【主权项】：
1.哺乳动物细胞无载体固定化培养方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：(1)促使哺乳动物细胞在悬浮培养条件下形成细胞团：调整培养基中的Ca2+浓度为500～2000μM，血清浓度为1～5％(v/v)，细胞接种密度为2～6×105cells/ml，搅拌速度为25～50r/min；(2)控制细胞团的平均粒径：提高搅拌速度至50～120r/min；(3)利用细胞团的自然沉降和旋转过滤器截流细胞团，更换培养基或连续灌注培养基；(4)使细胞团松散、解聚：调整培养基中的Ca2+浓度为0μM，血清浓度为1％(v/v)，搅拌速度为50～100r/min、在培养基中加入浓度为500～750IU/ml的肝素；(5)使自细胞团解聚的游离细胞再形成细胞团，放大培养规模：调整培养基中的Ca2+浓度为500～2000μM、血清浓度为1～5％(v/v)、细胞接种密度2～6×105cells/m1，搅拌速度为25～50r/min。
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