[发明专利]白桂木的离体繁殖方法

摘要

本发明公开了白桂木的离体繁殖方法。该方法由以下步骤组成：(1)无菌外植体的获得、(2)芽的诱导、(3)芽的增殖、(4)根的诱导与培养、(5)试管苗的移栽。本发明对受威胁的濒危植物白桂木进行离体组培快繁殖技术的研究，以抢救该物种，使其种群得以繁衍扩大；并利用离体组培的方法大量提供了珍稀植物白桂木的优良组培苗，对保存和保护濒危植物白桂木并对其加以开发利用具有重要的生态效益、社会效益和经济效益。

主权项

1、白桂木的离体繁殖方法，其特征在于：该方法依次由以下步骤组成：(1)、无菌外植体的获得；以完整植株的茎尖、茎段、叶片为外植体；将茎尖、茎段用自来水冲洗干净后，用70％酒精处理20min，无菌水冲洗3～5次，0.1％升汞处理5～10min，无菌水洗3～5次，茎尖切成长1.5cm切块接种到诱导培养基中；叶片用自来水冲洗干净后，用70％酒精处理30s，无菌水冲洗3～5次，0.1％升汞处理5～8min，无菌水洗3～5次。叶片切成1cm×2cm的切块接种到诱导MS培养基中；接种时间为35天；(2)、芽的诱导；用培养基对(2)步骤中获得的无菌外植体进行培养，产生丛芽，培养基为改良的MS；(3)、芽的增殖；将茎诱导出的直径0.1～0.2cm，高0.3～0.5cm的再生芽切下，接种到培养基中进行继代培养，茎尖开始时基部膨大，颜色开始转为淡黄色，并长出淡黄色到淡绿色的小芽，这些小芽培养20～25天长出绿色叶片，长成直径0.1～0.3cm，高为0.5～1.5cm的从芽；(4)、根的诱导与培养；将生长于继代培养基中的高0.5～1.0cm、带1～2片叶的从芽切成单芽接种到含MS培养基中培养，培养时间为30～50天，诱导出生根苗；(5)、试管苗的移栽；把苗高≥1.5cm的生根苗置于培养室外或即将移栽的荫棚内练苗10～15天，洗净试管苗附着的培养基，种植到河沙∶泥炭土＝1∶8的基质，或河沙中，苗床遮荫70～80％，保持空气湿度50～80％以上，温度保持在22～35℃，移栽后每3天喷施1/2MS营养液，每7～10天喷施800～1000倍的百菌清等杀菌剂，移栽后一个月植株长出新根；待苗长出3-4片叶片，高5cm即可移植到营养杯中，基质采用塘泥∶泥炭土∶粗沙＝3∶6∶1；杯苗置遮荫40～60％的室外，并逐渐移去遮荫网，新根长出，苗高≥25cm，即可定植；