[发明专利]杨树转抗虫基因技术

摘要

本发明属于生物工程、生物遗传工程技术，涉及一种杨树转抗虫基因技术。其特征在于是以杨树优良品种欧美杨107为试材，采用杨树转抗虫基因技术进行了组培再生、农杆菌介导的抗虫基因转化及转基因植株的抗虫性研究，建立了高效的外植体再生体系、进行了遗传转化条件的研究，确定了叶片及茎段外植体对潮霉素抗性的临界浓度、获得了转基因再生植株，组培快繁了大量转基因杨树苗；本发明可培育转基因抗虫及耐干旱、耐盐碱、抗风沙的速生杨树，应用于国家三北防护林建设以及绿化环保、防风固沙等公用事业以及林纸一体化建设项目。转基因杨具有抗虫害、速生、纤维含量高等优越性，在造林绿化、防止土地沙化等方面有广阔的市场前景。

主权项

1、一种杨树转抗虫基因技术，其特征在于：是以杨树优良品种欧美杨107(Populus×euramericanacl.“74/76”)为试材，采用杨树转抗虫基因技术进行了组培再生、农杆菌介导的抗虫基因转化及转基因植株的抗虫性研究，建立了高效的外植体再生体系、进行了遗传转化条件的研究，确定了叶片及茎段外植体对潮霉素抗性的临界浓度、获得了转基因再生植株，组培快繁了大量转基因杨树苗；试验选用的材料为：(1)、菌种和质粒：含Bt基因的植物表达载pCUBVgb转化的根癌农杆菌LBA4404；(2)、植物材料：欧美杨107(Populus×euramericanacl.“74/76”)；(3)、供试昆虫：榆毒蛾(LeucomacandidaStaudinder)幼虫和天幕毛虫幼虫；(4)、主要化学试剂：Km(卡那霉素)、Cb(羧苄青霉素)、Hyg(潮霉素)、Rif(利福霉素)；PCR扩增引物、Taq酶、dNTP、buffecr、λDNA：(5)、培养基：(1)、农杆菌培养基(YEB)蛋白胨(Peptone)5g/L；蔗糖(Sucrose)1g/L；牛肉膏(BeetExtract)5g/L；酵母提取物((YeastExtract)5g/L；MgSO4·7H2O0.5g/L；固体则加入1.4％琼脂，以1mol/LNaOH调pH值为7.2；(2)、植物组织培养基以MS为基本培养基，附加不同浓度激素，配置各种培养基：继代培养基：MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.1mg/L+Hyg7mg/L；共培养培养基：茎段：MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.02mg/L；叶片：MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L；筛选分化培养基：茎段：MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.02mg/L+Hyg7mg/L+250mg/LCb；叶片：MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L+Hyg5mg/L+250mg/LCb；生根培养基：MS+0.02mg/LIBA+Hyg5mg/L+Cb250mg/L；各培养基均含3％蔗糖和0.7％琼脂，PH值为5.8，抗生素抽滤灭菌，其它成分高压灭菌；