[发明专利]一种降解石油固体菌剂的制备方法

摘要

一种降解石油固体菌剂的制备方法。采用真菌菌种中毛霉1株,青霉1株,曲霉1株,木霉1株和白腐真菌2株,分别取所述属中一株,经斜面培养、摇瓶培养、固体培养得单一固体培养物,将每种单一固体培养物等量混合均匀制得成品。它协同作用强、降解能力大,适用于稀油、稠油、特稠油和高凝油污染土壤的生物修复。

主权项

1.一种降解石油固体菌剂的制备方法，其特征在于：采用真菌菌种，具体为：真菌中毛霉1株，青霉1株，曲霉1株，木霉1株和白腐真菌2株，分别取所述属中一株，经斜面培养、摇瓶培养、固体培养得单一固体培养物，将每种单一固体培养物等量混合均匀制得成品；具体操作步骤为：(1)斜面培养：采用所述菌种，用常规方法制备的马铃薯培养基，将菌种接到准备好的试管中斜面上，在25～28℃培养5～7天，待孢子形成备用；(2)摇瓶培养：上述斜面培养菌种均采用马铃薯综合培养基，培养基pH为自然，称取去皮、切成小块的马铃薯200～220g，加水煮25～30min后，过滤，上清液定容至体积为1000ml，然后加入葡萄糖或蔗糖18～20g，磷酸二氢钾1.0～1.2g，硫酸镁1.4～1.6g，Vb微量；将所述马铃薯综合培养基分装到300～500ml容积的三角瓶中，每瓶装量为75～150ml，在1个大气压下灭菌20～30min，冷却至室温～45℃，然后在无菌室中接种，即将斜面培养好的菌体转移到摇瓶中，置于摇床上，调节摇床速度120～125转/分钟，25～28℃培养5～7天，待孢子长好后进行固体培养；(3)固体培养：固体培养基成分为高压灭菌后的麦麸或稻糠、稻壳和锯末，稻壳∶麦麸或稻糠∶锯末比例为3∶1∶1，将摇瓶中的液体培养菌体倒入上述采用的马铃薯综合培养基中混合均匀，此液代替水分，与灭菌后的麦麸或稻糠、稻壳和锯末固体培养基混合均匀，使含水率50-60％，于25～28℃室内培养5～7天，即得单一固体培养物；将每种单一固体培养物等量混合均匀即制得成品，或将单一固体培养物风干，在常温下分别保存，临用前等量混合均匀制得成品。