本发明涉及生物技术领域，提供了一种逆行跨多级突触的标记方法及其应用。逆行跨多级突触标记的方法包括以下步骤：S1：构建表达N2cG的腺相关病毒核心质粒，并利用所述腺相关病毒核心质粒制备可跨血脑屏障的重组PHP.eB血清型腺相关病毒；S2：将所述重组PHP.eB型腺相关病毒经尾静脉注射到小鼠活体；S3：注射3周后，再注射CVS‑N2c‑ΔG‑EGFP病毒，其中，所述腺相关病毒核心质粒的序列如SEQ ID NO：3所示。本发明提供的逆行跨多级突触标记的方法可有效标记全脑多级输入网络，在特定脑区的多级神经输入结构与功能解析、疾病模型建立和基因治疗评估等方面具有广泛的应用价值和市场前景。
本发明公开了一种慢病毒转移载体、表达PylRS及tRNACUA的细胞系及制备方法与应用。首先构建编码吡咯赖氨酸氨酰tRNA合成酶及tRNACUA的慢病毒转移载体(SEQ ID NO：2)，然后通过细胞转染拯救携载了上述目的元件的慢病毒，并将慢病毒以高MOI感染HEK293T细胞，传代5次后挑单克隆做PCR鉴定获得稳定细胞系。为了验证细胞系对目的蛋白掺入非天然氨基酸的效果，制备了绿色荧光蛋白报告质粒pcDNA3.1‑EGFP‑Y39TAG(SEQ ID NO：3)，通过该报告质粒转染验证了上述稳定细胞系的功能。
