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[发明专利]一种制备BM-MSCs条件培养基的方法、条件培养基以及应用-CN202010902252.9有效
发明人：陈浩;沙卫红;骆昱均;马发鑫;李金亮;郭科航 -专利权人：广东省人民医院
申请日： 2020-08-31 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种制备BM－MSCs条件培养基的方法、条件培养基以及应用，方法包括(1)将PHD2·shRNA构建到慢病毒基因转移载体pGCSIL－GFP上；(2)在感染复数(MOI)为10下，用含shPHD2－GFP的慢病毒转染BM－MSCs；(3)通过检测GFP荧光及PHD2蛋白表达确定稳定转染的BM－MSCs，进行细胞分选富集，然后将其在新的无血清基础培养基中培养48小时，得到含有BM－MSCs高效表达旁分泌物质的基础条件培养基；(4)将基础条件培养基进行超滤浓缩50倍，控制截留分子量为5kDa，得到浓缩条件培养基，然后将得到的条件培养基在零下20℃进行储存；其中，步骤(3)中得到的基础条件培养基中，1mL非浓缩条件培养液相当于1.5～2.5×105BM－MSCs分泌量。本发明所制备的条件培养基能够增强骨髓间充质干细胞旁分泌的效果。
一种制备 bm mscs 条件培养基方法以及应用

[发明专利]一种验证沉默PHD2能够增强BM-MSCs旁分泌效果的试验方法-CN202010901214.1有效
发明人：陈浩;沙卫红;骆昱均;马发鑫;李金亮;郭科航 -专利权人：广东省人民医院
申请日： 2020-08-31 - 公布日： 2022-08-02 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明提供了一种验证沉默PHD2能够增强BM－MSCs旁分泌效果的试验方法，包括：第一步、制备PHDMSC－CM与MSC－CM，第二步、获取实验NEC幼鼠，第三步、实验验证，第四步、处理数据，其中，制备PHDMSC－CM的过程为将大鼠PHD2·shRNA构建到慢病毒基因转移载体pGCSIL－GFP上，在感染复数(MOI)为10下，用含shPHD2－GFP的慢病毒转染BM－MSCs，通过检测GFP荧光及PHD2蛋白表达确定稳定转染的BM－MSCs，运用流式细胞仪进行细胞分选富集，然后进一步培养，培养后将其在新的无血清基础培养基中再培养48小时，将细胞与培养基分离后，得到含有BM－MSCs高效表达旁分泌物质的基础PHDMSC－CM；本发明通过实验验证了沉默PHD2能够以及如何增强骨髓间充质干细胞旁分泌的效果。
一种验证沉默 phd2 能够增强 bm mscs 分泌效果试验方法

[发明专利]制备高效表达旁分泌RG1-BM-MSC培养基的方法、条件培养基及应用-CN202011297589.8在审
发明人：陈浩;沙卫红;骆昱均;马发鑫;卢铨;张宸;卓泽伟;郭科航 -专利权人：广东省人民医院
申请日： 2020-11-18 - 公布日： 2021-03-26 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明提供了一种制备高效表达旁分泌RG1－BM－MSC培养基的方法、条件培养基及应用，方法包括以下步骤：(1)制备含不同浓度人参皂苷(RG1)的基础培养基，将骨髓间充质干细胞(BM－MSC)分别在上述浓度不同的RG1基础培养基中预激活七天；(2)将骨髓间充质干细胞转移至新鲜无血清培养基继续培养48h，得到含有高效表达旁分泌物质的一系列非浓缩基础条件培养基，将该一系列非浓缩基础条件培养基进行超滤浓缩50倍，控制截留分子量为5kDa，并在－20℃下储存；(3)将以有效剂量10Gy辐射的IEC－6细胞分别在该一系列浓缩条件培养基中连续培养七天，并测定细胞活力，以确定RG1激活骨髓间充质干细胞的最佳浓度。本发明所制备的RG1－BM－MSC培养基能够增强骨髓间充质干细胞旁分泌的效果。
制备高效表达分泌 rg1 bm msc 培养基方法条件应用