本发明涉及胆固醇侧链水解酶技术领域,尤其是涉及一种P450SCC突变体及核苷酸、表达载体、宿主细胞。所述P450SCC突变体为在野生型P450SCC氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的基础上包含L109H、N249S、N249Y、L250M、L250I、D253E、F255Y、L257R、F258Y、F258L、F258V、R304C、G307K、N446D中的一个或几个氨基酸位点的突变。本发明通过定点突变技术对人源P450SCC进行改造,具有较高的酶活性,能够有效提高甾醇转化为孕烯醇酮的转化率。