本发明公开了一种重组质粒,含有tetH启动子、萤火虫荧光素酶基因luc、氯霉素抗性基因cat、复制子oriV、接合转移基因mob、复制蛋白基因repA,repB,repC和卡那霉素抗性基因Kanr元件,其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还公开了所述重组质粒在鉴定嗜酸性喜温硫杆菌基因表达中的应用,是利用其构建的重组菌经培养后检测荧光素酶活性,根据荧光值得大小判定嗜酸性喜温硫杆菌基因表达的强度。该方法背景低、灵敏度高,操作简单且具有很高的可重复性、准确度,为实现筛选高效启动子并鉴定嗜酸性自养菌中的基因表达强度进而构建抗逆、高效浸出的工程菌株具有理论指导意义及现实应用价值。