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[发明专利]一种芋螺毒素和胶原蛋白融合蛋白及其制备方法和应用-CN202111415810.X有效
发明人：魏文培;郝东;周浩;赵硕文;侯增淼 -专利权人：西安德诺海思医疗科技有限公司
申请日： 2021-11-25 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种芋螺毒素和胶原蛋白融合蛋白及其制备方法和应用，涉及生物基因技术领域；所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.5所示。本本发明的融合蛋白经过证实，在不影响芋螺毒素功效的前提下，胶原蛋白融合能够有效的降低芋螺毒素细胞毒性，提高原料生物安全性；同时在分子设计时添加了透皮肽，其除皱和保湿能力经过功效验证，证明了透皮肽的加入可以有效的增加融合蛋白透皮吸收能力，促进了芋螺毒素的透皮吸收。
一种毒素胶原蛋白融合及其制备方法应用

[发明专利]一种巴斯德毕赤酵母发酵表达重组III型贻贝粘蛋白及其纯化方法-CN202310747165.4在审
发明人：郝东;周浩;魏文培;李敏;赵硕文;乔莎;侯增淼 -专利权人：西安德诺海思医疗科技有限公司
申请日： 2023-06-25 - 公布日： 2023-10-10 - 主分类号： C07K14/435 文献下载
摘要：本发明公开了一种巴斯德毕赤酵母发酵表达重组III型贻贝粘蛋白及其纯化方法，该法首次采用巴斯德毕赤酵母发酵诱导表达的重组III型贻贝粘蛋白发酵液作为原料，采用固液分离、澄清过滤、超滤浓缩、酶促反应、疏水层析、冷冻干燥的方法，提供一种每升发酵液经纯化后获取冻干粉纯品量大于0.85 g/L、纯度大于95%、L‑3,4二羟基苯丙氨酸含量大于0.9%、内毒素含量小于1 EU/mg的重组III型贻贝粘蛋白纯化方法，纯化工艺过程简单，极大地降低工业化生产成本，更适于工业化生产。
一种巴斯德毕赤酵母发酵表达重组 iii 贻贝蛋白及其纯化方法

[发明专利]一种提高巴斯德毕赤酵母发酵溶胞物滤液稳定性的方法-CN202310249899.X在审
发明人：李敏;魏文培;乔莎;周浩;张立峰;郝东;赵硕文;侯增淼 -专利权人：西安德诺海思医疗科技有限公司
申请日： 2023-03-15 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： A61K8/9728 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高巴斯德毕赤酵母发酵溶胞物滤液稳定性的方法，涉及生物发酵技术领域。所述方法为由表达重组热休克蛋白的巴斯德毕赤酵母菌发酵制得过表达热休克蛋白的巴斯德毕赤酵母发酵溶胞物滤液。本发明方法制得的过表达热休克蛋白的巴斯德毕赤酵母发酵溶胞物滤液具有比普通酵母的发酵溶胞物滤液更高的稳定性，能够解决目前天然巴斯德毕赤酵母发酵溶胞物滤液成份复杂，稳定性低的问题。此外，过表达热休克蛋白的巴斯德毕赤酵母发酵溶胞物滤液还具有抗炎、抗光老化、修复、促进细胞增殖、防脱发的功效，无致敏性，在化妆品领域具有广阔的应用前景。
一种提高巴斯德毕赤酵母发酵溶胞物滤液稳定性方法

[发明专利]一种纤连蛋白和胶原蛋白的融合蛋白及其制备方法-CN202210962053.6在审
发明人：魏文培;乔莎;郝东;赵硕文;李敏;侯增淼 -专利权人：西安德诺海思医疗科技有限公司
申请日： 2022-08-11 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种纤连蛋白和胶原蛋白的融合蛋白及其制备方法，融合蛋白的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.4所示，融合后的胶原蛋白在不影响纤连蛋白功效的前提下，能够有效的降低纤连蛋白细胞毒性，提高原料生物安全性；与原单一序列相较，能够有效提高纤连蛋白细胞增殖率；与胶原蛋白的融合也使得纤连蛋白表达量明显增高，能够使得表达量达到2g/L，远高于原单一序列表达量；与此同时，纤连蛋白在‑20℃，4℃，40℃稳定程度远高于原单一序列稳定性。
一种蛋白胶原融合及其制备方法

[发明专利]重组超氧化物歧化酶的制备方法-CN202211505046.X在审
发明人：周浩;侯增淼;郝东;魏文培;乔莎;李敏;赵硕文;张立峰;崔雪君 -专利权人：西安德诺海思医疗科技有限公司
申请日： 2022-11-28 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本申请提供一种重组超氧化物歧化酶的制备方法，涉及基因重组工程菌发酵技术领域。该方法包括：将毕赤酵母工程菌接种于种子罐中培养；种子罐的溶氧满足第一预设条件后，将毕赤酵母工程菌移至发酵罐中发酵培养；发酵罐的发酵培养基包括：CaCl2·2H2O、KH2PO4、MgSO4·7H2O、KOH、甘油、以及大豆蛋白胨；发酵罐的溶氧满足第二预设条件后，使用甘油培养基进行补料，直至发酵罐的物料湿重增加至150g/L‑180g/L后，停止使用甘油培养基补料；发酵罐的甘油耗尽后，向发酵罐中加入甲醇进行诱导表达。本申请可以以较低的生产成本实现利用工程微生物制备SOD的工艺，且能够减少生产后期生成的蛋白酶、减少重组蛋白大量降解的现象，能够有效提高发酵表达量及超氧岐化酶的生物活性。
重组超氧化物歧化酶制备方法

[发明专利]一种毕赤酵母表达重组人参蛋白的制备方法-CN202211730963.8在审
发明人：魏文培;乔莎;郝东;赵硕文;侯增淼 -专利权人：西安德诺海思医疗科技有限公司
申请日： 2022-12-30 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种毕赤酵母表达重组人参蛋白的制备方法。利用去除了a‑factor信号肽元件的通用9K载体骨架与含有人参蛋白自身信号肽元件的目的基因构建重组质粒并转化毕赤酵母，使毕赤酵母能够有效表达重组人参蛋白，所得重组人参蛋白生物安全性高，可以促进成纤维细胞增殖，并且抑制ROS活性，对皮肤有明显的修护和抗光老化作用。
一种酵母表达重组人参蛋白制备方法

[发明专利]一种仿生重组V型贻贝粘蛋白及其制备方法和应用-CN202211700258.3在审
发明人：侯增淼;魏文培;郝东;周浩;乔莎;赵硕文;张立峰;李敏 -专利权人：西安德诺海思医疗科技有限公司
申请日： 2022-12-28 - 公布日： 2023-04-04 - 主分类号： C07K14/435 文献下载
摘要：本发明公开了一种仿生重组V型贻贝粘蛋白及其制备方法和应用。所述的重组V型贻贝粘蛋白是由天然贻贝的Mfp‑5和构成贻贝足丝纤维骨架的蛋白融合组成。在制备过程中，将融合基因与酪氨酸酶基因共表达，并利用表达的酪氨酸酶对重组贻贝粘蛋白中的酪氨酸残基进行多巴修饰，从而获得具有生物活性的重组V型贻贝粘蛋白，并且产量高、纯度高、内毒素含量低，完全满足药品、医疗器械及化妆品领域的应用需求。
一种仿生重组贻贝蛋白及其制备方法应用

[发明专利]一种毕赤酵母表达人源化弹性蛋白的纯化方法-CN202211575214.2在审
发明人：郝东;侯增淼;赵硕文;魏文培;周浩;李敏;乔莎;张立峰;崔雪君 -专利权人：西安德诺海思医疗科技有限公司
申请日： 2022-12-08 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C07K14/78 文献下载
摘要：本发明公开了一种毕赤酵母表达人源化弹性蛋白的纯化方法。向毕赤酵母工程菌的发酵液中加入氯化钠，常温搅拌后离心分离；清洗沉淀中的杂质后在尿素溶液中复溶；通过过滤澄清、超滤浓缩及冷冻干燥，获得纯度大于95％的人源化弹性蛋白，且每升发酵液的纯品产量达0.8g以上、收率大于70％。本发明解决了发酵生产人源化弹性蛋白过程中生产设备功能要求高、纯化工艺流程长、收率低的问题。
一种酵母表达人源化弹性蛋白纯化方法

[发明专利]一种仿生重组III型贻贝粘蛋白及其制备方法和应用-CN202211700260.0在审
发明人：侯增淼;魏文培;郝东;周浩;乔莎;赵硕文;张立峰;李敏 -专利权人：西安德诺海思医疗科技有限公司
申请日： 2022-12-28 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种仿生重组III型贻贝粘蛋白及其制备方法和应用。所述的重组III型贻贝粘蛋白是由天然贻贝的Mfp‑3和构成贻贝足丝纤维骨架的蛋白融合组成。在制备过程中，将融合基因与酪氨酸酶基因共表达，并利用表达的酪氨酸酶对重组贻贝粘蛋白中的酪氨酸残基进行多巴修饰，从而获得富含多巴基团的重组III型贻贝粘蛋白，该重组III型贻贝粘蛋白能够在中性pH下溶解稳定，并且产量高、纯度高、内毒素含量低，完全满足药品、医疗器械及化妆品领域的应用需求。
一种仿生重组 iii 贻贝蛋白及其制备方法应用

[发明专利]一种重组弹性蛋白的生产方法-CN202211048226.X在审
发明人：周浩;侯增淼;郝东;魏文培;乔莎;李敏;赵硕文;张立峰;崔雪君 -专利权人：西安德诺海思医疗科技有限公司
申请日： 2022-08-30 - 公布日： 2023-03-10 - 主分类号： C07K14/78 文献下载
摘要：本发明提供了一种重组弹性蛋白的生产方法，涉及基因重组工程菌发酵纯化技术领域。其中重组弹性蛋白的生产方法包括使用特异性发酵培养基、培养方法、诱导方法、破胞方法、纯化方法获得重组弹性蛋白。本发明可以提高重组弹性蛋白的发酵表达量、纯化效率，降低内毒素水平，从而提高重组弹性蛋白的生产水平，适用于稳定的工业化生产。同时，本发明生产的重组弹性蛋白与从动物组织提取的弹性蛋白相比具有极好的生物相容性、无病毒隐患、排异反应低等特点。
一种重组弹性蛋白生产方法

[发明专利]一种重组类贻贝粘蛋白内毒素去除方法-CN202211237544.0在审
发明人：郝东;侯增淼;赵硕文;魏文培;周浩;李敏;乔莎;张立峰;崔雪君 -专利权人：西安德诺海思医疗科技有限公司
申请日： 2022-09-30 - 公布日： 2023-01-17 - 主分类号： C07K14/435 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组类贻贝粘蛋白内毒素的去除方法，涉及生物蛋白纯化技术领域。该方法包括：S1，向被内毒素污染的蛋白制剂中加入含有尿素与氯化钠的混合溶液，使蛋白充分溶解，得到上样料液；S2，用缓冲液平衡好层析柱，将所述上样料液过柱，收集穿柱料液；S3，向穿柱料液中加入盐酸，进行酸热反应；S4，对S3反应完的料液调节pH值至大于或等于3.0，经透析过滤浓缩收集截留液，得到内毒素含量小于或等于5EU/mg的产物。本发明提供的去除方法在去除目标蛋白内毒素的同时，能够获得较高的目标蛋白回收率，具有简单、高效的优点，可进行大批量工业化生产。
一种重组贻贝蛋白内毒素去除方法

[发明专利]一种重组III型人源化胶原蛋白、核酸、载体及植入剂-CN202111391978.1有效
发明人：侯增淼;魏文培;周浩;郝东;赵硕文 -专利权人：西安德诺海思医疗科技有限公司
申请日： 2021-11-19 - 公布日： 2022-11-08 - 主分类号： C07K14/78 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组III型人源化胶原蛋白、核酸、载体及植入剂，涉及生物基因技术领域；本发明选取天然人III型胶原蛋白α1链中经长期筛选获得的稳定性佳的序列肽段549‑560aa、597‑613aa、881‑902aa、648‑662aa，将四段肽链按顺序拼接组成单体，然后对单体进行串联表达。经发酵纯化，所获得的重组III型人源化胶原蛋白稳定性高，有效地解决了重组III型人源化胶原蛋白在临床使用过程中降解的问题，可制备成液体制剂保存和使用。
一种重组 iii 型人源化胶原蛋白核酸载体植入

[发明专利]一种重组类贻贝粘蛋白纯化方法-CN202210469523.5在审
发明人：郝东;赵硕文;魏文培;乔莎;周浩;张立峰;侯增淼 -专利权人：西安德诺海思医疗科技有限公司
申请日： 2022-04-28 - 公布日： 2022-08-05 - 主分类号： C07K14/435 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组类贻贝粘蛋白纯化方法，涉及蛋白纯化方法技术领域。本发明提供的重组类贻贝粘蛋白纯化方法，该法首次采用大肠杆菌工程菌发酵诱导表达的重组类贻贝粘蛋白发酵液作为原料，采用破胞除杂质、酶催化氧化、层析纯化、层析除内毒素的方法，提供一种每升发酵液纯品产率可达0.7g/L、纯度大于95％、L‑3,4二羟基苯丙氨酸(L‑DOPA)含量大于0.7％且内毒素含量小于20EU/mg的重组类贻贝粘蛋白(Mlfp‑151，理论分子量22.61KD)纯化方法，纯化工艺过程简单，适合工业化生产。
一种重组贻贝蛋白纯化方法

[发明专利]一种重组人源化胶原蛋白及其纯化和内毒素去除方法-CN202111560397.6在审
发明人：郝东;周浩;魏文培;赵硕文;侯增淼 -专利权人：西安德诺海思医疗科技有限公司
申请日： 2021-12-20 - 公布日： 2022-03-11 - 主分类号： C07K14/78 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组人源化胶原蛋白及其纯化和内毒素去除方法，涉及生物工程技术领域；本发明首次采用复合阳离子交换填料pH梯度洗脱达到一步去除内毒素并获取高纯度目标蛋白的效果，在精细纯化过程中采用pH值7.0～7.5的磷酸盐缓冲液作为流动相B1，可将杂蛋白及内毒素洗脱干净；采用经碱试剂调节pH值至8.0～8.5的注射用水作为流动相B2，既可洗脱目标蛋白，又避免了采用常规含氯化钠缓冲液洗脱目标蛋白的弊端，在后续纯化步骤中无需进行长时间的脱盐过程，且得到的产品中目标蛋白含量较高，极大的简化纯化工艺，缩短纯化时间，是一种理想的大规模生产重组人源化胶原蛋白的纯化和内毒素去除方法。
一种重组人源化胶原蛋白及其纯化内毒素去除方法

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