结核分枝杆菌的快速检测引物、试剂盒及其使用方法,试剂盒包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的引物。基于巢式PCR的原理,通过逻辑筛选获得不与其它物种匹配的特异性基因设计高特异性的引物。进行PCR验证引物特异性,确定可用于鉴定结核分枝杆菌的特异性检测。PCR扩增产物经琼脂糖电泳检测,依据能否扩增出目的片段来实现结核分枝杆菌简便、经济、快速的检测。具有快速、简单、经济、准确、灵敏的特点,且该方法对仪器的要求较低,能够广泛应用于县级及以上级别的医院。该方法的建立能够帮助临床医生快速准确诊断结核病患者,及时用药,达到早诊断、早治疗的目的。