本发明属于基因检测领域,涉及荧光生物分析,特别是指基于滚环信号放大的Pax‑5a基因检测试剂盒及其使用方法。该试剂盒包括Pad‑lock、A1链、A2链、A3链、AP链、缓冲液体系、T4连接酶、Phi29 DNA聚合酶和dNTPs,其中Pad‑lock序列如SEQ ID No.1所示、A1链序列如SEQ ID No.2所示、A2链序列如SEQ ID No.3所示、A3链序列如SEQ ID No.4所示、AP链序列如SEQ ID No.5所示。本申请的试剂盒操作非常简便,过程时间短,仅需5个小时;在检测范围内展现出极佳的稳定性;该试剂盒检测线低至3.33pM,具有较高的灵敏度。