本发明提供了可同时检测4种miRNA的qRT‑PCR检测专用引物探针组合,组合的序列是基于带有茎环结构的序列设计的;带有茎环结构的序列为如SEQ ID No.1‑SEQ ID No.4所示序列中的一条或多条;并提供了使用此引物探针组合的qRT‑PCR检测方法及检测试剂盒。与现有技术相对比,本发明具有以下优点:本发明提供了三条特异性茎环序列用以设计靶标的引物探针组,并提供了具有特定引物探针加样比例、金属离子浓度和UDG酶的检测方法及检测试剂盒,用以实现短起峰时间、引物探针高特异性、标准曲线灵敏度高的一步法多重实时荧光定量PCR检测技术,采用此技术可实现对miRNA的特异性检测。