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[发明专利]一种杜鹃热激转录因子Hsfs调控耐热能力的检测分析方法-CN202210077428.0有效
发明人：金松恒;申建双;胡玥 -专利权人：浙江农林大学暨阳学院
申请日： 2022-01-24 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种杜鹃热激转录因子Hsfs调控耐热能力的检测分析方法。本发明分别在RpHsfC1和RpHsfC1‑like基因的全长序列中选取一个目标片段，扩增目标基因片段与病毒载体重组，构建VIGS载体，将VIGS载体转化至杜鹃，通过荧光定量表达分析，结果发现经过VIGS沉默的目的基因的表达量受到抑制，说明成功沉默了目的基因，获得转基因植株。通过对沉默后植株进行光合荧光特征的分析，发现经过VIGS沉默掉目的基因RpHsfC‑1 like和RpHsfC‑1都对杜鹃耐热能力产生了影响。本发明通过初步鉴定基因的调控耐热能力，为杜鹃耐热性品种的培育提供了基因来源。
一种杜鹃转录因子 hsfs 调控耐热能力检测分析方法

[发明专利]杜鹃HSFC1基因的可变剪接体在植物抗高温胁迫中的应用-CN202310706504.4在审
发明人：金松恒;程和丰;申建双;李雪芹 -专利权人：浙江农林大学暨阳学院
申请日： 2023-06-15 - 公布日： 2023-09-05 - 主分类号： C07K14/415 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学和基因工程技术领域，具体涉及杜鹃HSFC1基因的可变剪接体在植物抗高温胁迫中的应用。本发明是首次发现锦绣杜鹃HSFC1基因存在两种可变剪接体，且该两种剪接体均对高温胁迫敏感，通过分别对HSFC1a和HSFC1b基因进行超表达，发现基因表达水平提高后，植物抗高温胁迫的能力明显增强，呈现出显著的高温抗性，可以用于基因编辑分子育种，为培育抗高温胁迫的植物品种提供依据，且为抗高温胁迫观赏植物的种质创新提供了新途径。因此，HSFC1基因是一种适用于创制和选育抗高温植物的新材料和新品种的新基因资源，对于植物耐热品种选育具有较重要意义。
杜鹃 hsfc1 基因可变剪接植物高温胁迫中的应用

[发明专利]锦绣杜鹃HSFB3基因在增强植物抗高温胁迫中的应用-CN202310706496.3在审
发明人： 申建双;程和丰;金松恒;李雪芹 -专利权人：浙江农林大学暨阳学院
申请日： 2023-06-15 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C07K14/415 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，具体涉及锦绣杜鹃HSFB3基因在增强植物抗高温胁迫中的应用。本发明是首次发现锦绣杜鹃HSFB3基因对高温胁迫敏感，通过对HSFB3基因进行超表达，使得该基因表达水平提高后，植物抗高温胁迫的能力明显增强，呈现出显著的高温抗性，可以用于基因编辑分子育种，为培育抗高温胁迫的植物品种提供依据，且为抗高温胁迫观赏植物的种质创新提供了新途径。因此，HSFB3基因是一种适用于创制和选育抗高温植物的新材料和新品种的新基因资源，对于植物耐热品种选育具有较重要意义。
锦绣杜鹃 hsfb3 基因增强植物高温胁迫中的应用

[发明专利]基于VIGS的锦绣杜鹃叶片基因沉默体系及其构建方法-CN202210063993.1在审
发明人：金松恒;申建双;胡玥 -专利权人：浙江农林大学暨阳学院
申请日： 2022-01-20 - 公布日： 2022-07-12 - 主分类号： C12N15/29 文献下载
摘要：本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及基于VIGS的锦绣杜鹃叶片基因沉默体系及其构建方法。本发明具有时间短，速度快，高通量，不需要依赖于稳定的遗传转化的特点，具体包括以下步骤：构建含有特定目标基因片段的TRV2重组质粒，并和TRV1分别转化到农杆菌GV3101中，得到阳性农杆菌菌株并分别进行增殖后混合得到混合侵染液；将所述混合侵染液侵染锦绣杜鹃叶片中，实现对特定目标基因的沉默。本发明探究了可实现锦绣杜鹃叶片基因沉默的方法，利用本发明所述方法对锦绣杜鹃进行侵染，可使目标基因表达水平降低50％，为下一步锦绣杜鹃功能基因组学研究提供技术平台，为下一步验证锦绣杜鹃基因功能奠定基础。
基于 vigs 锦绣杜鹃叶片基因沉默体系及其构建方法

[发明专利]一种连翘叶片TRV载体介导病毒诱导基因沉默的方法-CN201810729116.7有效
发明人：潘会堂;申建双;司未佳;张启翔;程堂仁;王佳 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2018-07-05 - 公布日： 2022-03-08 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种连翘叶片TRV载体介导病毒诱导基因沉默的方法。所述方法为：将含有特定目标基因片段的TRV2载体和TRV1载体分别转化到农杆菌感受态中；筛选得到阳性菌株后，进行增殖培养得到含有不同载体的两种单克隆菌体；将两种单克隆菌体离心并利用侵染液分别重悬菌体至OD600＝0.9～1.1后，将二者等体积混合，得到混合侵染液；将所述混合侵染液注入连翘中，实现对特定目标基因的沉默。本发明深入探究了可提高侵染成功效率的关键因素，筛选出了最优的侵染液组成配方和侵染时含有菌体的侵染液的OD值。利用本发明所述方法对连翘进行侵染，可使连翘叶片VIGS侵染的成功率达90％以上。
一种连翘叶片 trv 载体病毒诱导基因沉默方法

[发明专利]一种基于叶绿体基因组测序的杜鹃花科植物分析方法-CN202110622814.9在审
发明人：金松恒;申建双;李雪芹;徐艳霞 -专利权人：浙江农林大学暨阳学院
申请日： 2021-06-04 - 公布日： 2021-08-27 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于叶绿体基因组测序的杜鹃花科植物分析方法，包括如下步骤：S1、取样，DNA提取与测序，以锦绣杜鹃为实验材料，采集其新鲜的叶子，使用改良的CTAB方法提取总基因组DNA，通过250bp的双末端测序并获得相应数据；S2、叶绿体基因组组装；S3、叶绿体基因组注释；S4、叶绿体基因分析；S5、全基因组比较与分析；S6、系统进化分析，从NCBI的数据库中获得杜鹃花科已有的八个物种的叶绿体全基因组序列信息。本发明基于叶绿体基因组测序的杜鹃花科植物分析方法，得出结论：锦绣杜鹃叶绿体全基因组与杜鹃花科其他8个物种在基因组大小，结构，GC含量，基因结构方面有显着差异，但相对而言与越橘属植物更相近。
一种基于叶绿体基因组杜鹃花植物分析方法

[发明专利]TRV-based病毒诱导的报春花属植物基因沉默的方法-CN201910630368.9有效
发明人：潘会堂;司未佳;张启翔;申建双;刘颖;程堂仁;王佳 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2019-07-12 - 公布日： 2021-04-23 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明提供一种TRV‑based病毒诱导的报春花属植物基因沉默的方法。包括：A、根据报春花属植物目标基因，设计引物并扩增出该目标基因的DNA片段；B、将DNA片段连接到pTRV2载体上，得到重组载体；C、将pTRV1、重组载体分别转化农杆菌，所得转化子共同侵染植株。本发明首次证明TRV可成功应用于小报春基因沉默和功能验证，为报春花属植物的基因功能验证奠定了基础。本发明方法简单、研究周期短、无需基因全长和转化体系，获得目的表型效率高，可实现大量基因的快速功能验证。与现有的VIGS体系相比，本发明表型持续时间长，且在植株的不同部位均出现表型变化，对报春花属异型自交不亲和的遗传学研究具有重要意义。
trv based 病毒诱导报春花植物基因沉默方法

[发明专利]一种获得连翘属与六道木叶属属间杂种的方法-CN201410366170.1有效
发明人：潘会堂;申建双;张启翔;石超;程堂仁;王佳;孙明 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2014-07-29 - 公布日： 2014-11-19 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种获得连翘属与六道木叶属属间杂种的方法，具体步骤如下：1)以连翘属的连翘为母本，以六道木叶属的翅果连翘为父本，进行属间人工杂交，收取杂交后的种子；2)种植种子获得杂交后代材料，参照父本和母本进行形态学观察统计，并采用AFLP分子标记进行杂种鉴定，选取连翘属与六道木叶属属间杂种。本发明利用连翘属连翘与六道木叶属翅果连翘进行远缘杂交，实现了连翘属与六道木叶属属间基因交流，获得了属间杂交新种质。在本发明基础上，可丰富连翘属植物的遗传信息，为利用属间杂交进行连翘新品种培育成为可能，同时可进行近缘属亲缘关系研究。
一种获得连翘道木叶属属间杂方法

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