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- [发明专利]海葵荧光蛋白新基因及其克隆、表达与应用-CN02134652.6无效
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徐安龙;涂洪斌;熊茜
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中山大学
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2002-09-03
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2003-12-31
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C12N15/12
- 本发明公开了一种海葵荧光蛋白新基因hmGFP,该新基因长度为904bp,编码228个氨基酸的成熟肽,所表达的蛋白质等电点为7.89,分子量为25,903道尔顿;本发明还公开了该新基因的克隆、表达,设计了两对引物,分别构建原核融合表达载体pTRX-hmGFP、原核非融合表达载体pET21b-hmGFP、真核表达载体pCDNA3-hmGFP;表达的重组海葵荧光蛋白的荧光散射波长为~502nm,最大激发波长~490nm,并在~420nm处有一肩峰。本发明将hmGFP分别克隆于原核表达载体pET21b和真核表达载体pCDNA3实现了原核非融合表达和真核哺乳细胞表达,可用于欲示踪标记基因编码蛋白的胞内定位和功能研究。
- 海葵荧光蛋白基因及其克隆表达应用
- [发明专利]赤魟尾刺亲环素A基因的克隆、表达及生物活性-CN01136940.X无效
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徐安龙;涂洪斌;熊茜
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北京博奥环宇生物技术有限公司
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2001-12-25
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2003-07-09
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C07H21/04
- 本发明通过构建赤魟(Dasytisakajei)尾刺cDNA文库和DNA测序,并根据所获得的亲环素(CyP)EST3’端和载体核苷酸序列,设计引物,用PCR的方法,首次从赤魟尾刺cDNA文库中筛选克隆到亲环素A全长基因。新基因长度为656bp,编码167个氨基酸的成熟肽,所表达的蛋白质等电点为8.34,分子量约为18,021道尔顿。将赤魟尾刺亲环素A基因克隆于硫氧还蛋白基因融合表达载体pTRX的trxA基因3’末端,构建符合读码框的融合基因,该融合蛋白在大肠杆菌中以胞内可溶的形式存在,表达量可达60mg/l。通过Ni-Chelating亲和色谱层析,蛋白酶3C切割和凝胶过滤,得到纯度在95%以上成熟的重组赤魟亲环素A蛋白,得率为10mg/l。该蛋白具有肽基脯氨酸顺反异构酶活性。
- 赤魟尾刺亲环素基因克隆表达生物活性
- [发明专利]赤魟肿瘤抑制基因的克隆、表达及生物活性-CN01136939.6无效
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徐安龙;涂洪斌;熊茜
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北京博奥环宇生物技术有限公司
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2001-12-25
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2003-07-09
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C07H21/04
- 本发明通过构建赤魟(Dasytisakajei)尾刺cDNA文库和DNA测序,并根据所获得的IPL肿瘤抑制基因EST3’端和载体核苷酸序列,设计引物,用PCR的方法,从赤魟尾刺cDNA文库中筛选克隆到IPL全长基因。新基因长度为849bp,编码136个氨基酸的成熟肽(序列号码1)。所表达的蛋白质等电点为9.68,分子量约为15,690道尔顿。将赤魟尾刺IPL基因克隆于硫氧还蛋白基因融合表达载体pTRX的trxA基因3’末端,构建符合读码框的融合基因,该融合蛋白在大肠杆菌中以胞内部分可溶的形式存在,表达量可达40~60mg/l。通过Ni-Chelating亲和色谱层析,蛋白酶3C切割和凝胶过滤,得到纯度在95%以上成熟的重组赤魟肿瘤抑制蛋白,得率为5~8mg/l。该蛋白具有抑制选择性杀伤肿瘤细胞生长的活性。
- 肿瘤抑制基因克隆表达生物活性
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