本发明公开了一种检测微生态四联活菌制品中4种活菌的引物探针组合、试剂盒及应用,属于微生态活菌检测及鉴定技术领域。具体包括分别针对蜡样芽孢杆菌的glpF基因和/或gmk基因,针对粪肠球菌的gdh基因和/或gyd基因,针对嗜酸乳杆菌的pheS基因和/或ileS基因,针对婴儿双歧杆菌的clpC基因和/或fusA基因的引物探针组,其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1~24所示;能够同时鉴定微生态四联活菌制品中的4种微生物的种属关系,操作简单,耗时短,鉴定范围广,无需对样品中的细菌进行培养,能够直接对样品进行鉴定,快速省时,成本低,灵敏度高,有利于产品的快速检验。