本发明公开一种用于检测MTHFR基因多态性的引物对、探针及试剂盒;所述试剂盒包括有:针对MTHFR基因c.677位点设计的碱基序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物,所述SEQ ID No.1的5’端第一个碱基具有氨基修饰基团,所述SEQ ID No.2的5’端第一个碱基具有氨基修饰基团;针对MTHFR基因c.677位点设计的碱基序列如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的探针,所述SEQ ID No.3的一个碱基具有氨基修饰基团,所述SEQ ID No.4的一个碱基具有氨基修饰基团。与现有技术相比,本发明试剂盒可以显著缩短检测所需时间,减少非特异性扩增,可以检测SNPs和点突变,降低设计难度和检测成本,并且不影响诊断精度,实现单一反应管无开盖检测突变的方法,最大限度的避免气溶胶污染,方便临床使用,减少操作导致的误差。