本发明公开了一种快速检测碳青霉烯酶基因的引物组、试剂盒以及检测方法,引物组包括用于检测肠杆菌碳青霉烯酶耐药基因KPC、NDM、OXA48、VIM和IMP的扩增引物对和分子信标探针,核苷酸序列SEQ ID NO:1‑SEQ ID NO:15所示。本发明公开的试剂盒只需要一次加样、一个反应管和一个反应体系在2小时内完成五个肠杆菌常见的碳青霉烯酶耐药基因检测,具有快速、高效和准确等优点,大大缩短了检测时间,节约了检测成本,提高了检测效率;并且相比现有的探针法多重PCR,减少了引物设计以及引物间的干扰,可减少假阳性/假阴性的出现。