本发明公开了一种多重PCR引物组,由用于扩增链球菌(SS)GDH基因、大肠杆菌(E.coli)ompA基因、胸膜肺炎放线杆菌(APP)APXⅣA基因、巴氏杆菌(Pm)KMT1基因、副猪嗜血杆菌(HPS)ompP2基因的特异性上游引物及下游引物组成,各引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑10所示,本发明还公开了该引物组在制备猪呼吸道病原检测试剂盒中的应用以及一种检测猪呼吸道病原的方法。本发明实现了对SS、E.coli、APP、Pm、HPS五种猪呼吸道病原的单管一次性PCR检测,具有准确性高、特异性强、灵敏性好等优点。