本发明提供了一种检测四环素的ELISA传感器及其制备方法与应用,属于四环素检测技术领域,所述ELISA传感器包括与四环素阻遏蛋白结合的双链DNA,所述双链DNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1~2所示。本发明提供了一种检测四环素的ELISA传感器,所述ELISA传感器包括能与四环素阻遏蛋白结合的双链DNA(dsDNA),该ELISA传感器通过一步法检测食品中的四环素,操作简便、快捷。且本发明的ELISA传感器检测四环素的特异性强、灵敏度高且速度快,只需10min可完成0.1μM四环素的检测。另外,本发明的ELISA传感器的制备方法,操作简单、易行。