本发明涉及一种水稻育种技术领域的雄性不育基因OsLAP5的应用及恢复水稻雄性不育的方法；所述的雄性不育基因OsLAP5的碱基序列如SEQ ID N0.2所示，所述的应用是通过基因敲除或者抑制OsLAP5基因使得水稻孢粉素合成酶活性丧失或者表达水平降低，获得新的水稻雄性不育系可以用来生产杂交种子；本发明还涉及水稻雄性不育株系创制的方法，水稻不育株系在水稻制种中的用途，恢复雄性不育性状的方法。本发明获得的水稻突变体营养生长阶段没有任何异常，但纯合体植株完全不育。如果应用于杂交育种中，可以免除母本去雄的工作，大大提高生产效率，降低人工成本，在农业生产上具有重要的应用。
本发明涉及水稻TMS10基因的定点敲除系统及其应用。所述定点敲除系统如下，定点敲除系统包括CRISPR/Cas9系统和sgRNA靶点；sgRNA靶点为水稻雄性不育基因TMS10中含有PAM或NGG的序列；CRISPR/Cas9系统为CC‑TMS10‑1；CC‑TMS10‑1靶序列为SEQ ID NO.1序列的第2281位至第2299位。所述应用是通过单独使用CC‑TMS10‑1对不同粳稻和籼稻品种的TMS10基因进行靶向敲除；实验证明，在不同水稻品种中定点敲除诱导产生的纯合突变转化植株表现出温敏雄性不育特征。本发明为创造基于水稻温敏雄性不育基因TMS10的温敏雄性不育系种质资源、水稻杂交制种提供高效的育种方式。
