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[发明专利]一种从脂肪组织中高效分离提取脂肪间充质干细胞的方法-CN202011275178.9有效
发明人：张玲洁;吴基伟;郑婕 -专利权人： 广州杜德生物科技有限公司
申请日： 2020-11-16 - 公布日： 2021-03-23 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及一种从脂肪组织中高效分离提取脂肪间充质干细胞的方法。本发明公开的分离提取方法采用低浓度0.01% I型胶原酶溶液来消化脂肪组织，降低分离成本的同时降低I型胶原酶对细胞的伤害，提高细胞活率；另外，脂肪组织中加入无血清培养基后再进行消化，可在消化过程中维持细胞的生长繁殖，提高间充质干细胞的提取率。由于在I型胶原酶消化过程中无血清培养基的加入，使得未完全消化掉的脂肪组织中的细胞还保持着较好的活性，因此，本申请对未完全消化掉的脂肪组织继续培养至细胞汇合度为80%~90%时，再使用胰蛋白酶进行消化，获取间充质干细胞。本发明脂肪组织经两次消化提取的间充质干细胞得率高，且活率高。
一种脂肪组织高效分离提取间充质干细胞方法

[发明专利]一种基于卵巢靶向的干细胞组合物的干细胞制剂-CN202011486977.0在审
发明人：张玲洁;陈育广;张林艳 -专利权人： 广州杜德生物科技有限公司
申请日： 2020-12-16 - 公布日： 2021-03-16 - 主分类号： A61K35/50 文献下载
摘要：本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及一种基于卵巢靶向的干细胞组合物的干细胞制剂。本发明公开了一种干细胞组合物，由胎盘间充质干细胞和经血间充质干细胞组成。该干细胞组合物中胎盘间充质干细胞与经血间充质干细胞联合使用，可有效修降低雌激素水平，复卵巢损伤，恢复卵巢功能，对卵巢早衰的治疗效果显著优于单独使用胎盘间充质干细胞或经血间充质干细胞的效治疗效果，两者结合使用具有协同增效的作用。该干细胞组合物中两种间充质干细胞来源广泛，体外扩增稳定，无伦理道德问题，免疫原性低，使用安全，无毒副作用。
一种基于卵巢靶向干细胞组合制剂

[发明专利]一种细胞保存液及其在保存脐血NK细胞中的应用-CN202011275371.2有效
发明人：张玲洁;陈爱华;张林艳 -专利权人： 广州杜德生物科技有限公司
申请日： 2020-11-16 - 公布日： 2021-02-05 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种细胞保存液及其在保存脐血NK细胞中的应用。本发明公开了一种细胞保存液，包括：柠檬酸三钠、柠檬酸、葡萄糖、羟乙基淀粉、人血清白蛋白和水。本发明细胞保存液中柠檬酸三钠、柠檬酸、葡萄糖与羟乙基淀粉、人血清白蛋白协同配合，有效延长脐血的保存时间至72 h，保证脐血NK细胞存活率和数量与保存前基本不变，并且能分离扩增培养到正常倍数和数量的NK细胞。
一种细胞保存及其 nk 中的应用

[发明专利]一种多因子刺激脐血NK样T淋巴细胞的培养方法-CN202011275267.3在审
发明人：张玲洁;陈爱华;黄婉仪 -专利权人： 广州杜德生物科技有限公司
申请日： 2020-11-16 - 公布日： 2020-12-11 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种多因子刺激脐血NK样T淋巴细胞的培养方法。本发明公开了一种多因子刺激脐血NK样T淋巴细胞的培养方法，该培养方法先采用包被液对培养瓶进行包被，再加入OKT3单克隆抗体和IFN‑γ培养12h~24h后，再加入IL‑2、IL‑1a和IL‑15对CIK细胞进行诱导培养，收获CIK细胞。本发明在CIK细胞培养的特定阶段加入特定的细胞因子和OKT3单克隆抗体，使得本发明获得的CIK细胞的CD3CD56表型双阳性比例高、细胞活率和增殖倍数高，对K562细胞杀伤能力强。而且，本发明提供的培养方法操作简单，从而减少了出错概率和操作污染。
一种因子刺激 nk 淋巴细胞培养方法

[发明专利]人胚胎滋养细胞和胎盘间充质干细胞的分离纯化方法-CN201810904418.3有效
发明人：夏凡;张洁 -专利权人： 广州杜德生物科技有限公司
申请日： 2018-08-09 - 公布日： 2019-07-26 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明公开了一种人胚胎滋养细胞和胎盘间充质干细胞的分离纯化方法，包括：(1)胎盘处理；(2)细胞悬液预分离；(3)流式吸附分离；(4)胎盘间充质干细胞的脱附与分离；(5)人胚胎滋养细胞的纯化。本发明将抗体蛋白种植在温敏性壳聚糖共聚膜的外表面上，通过抗体对胎盘间充质干细胞的表面分子进行识别，来达到特异性结合的目的，并以流速递减的循环方式将胎盘间充质干细胞存留在特异温敏性壳聚糖共聚膜上。再利用降温加洗脱液的方式进行胎盘间充质干细胞与蛋白抗体的脱附与分离。本发明的分离方式温和，细胞存活率高，纯度也高。
胎盘间充质干细胞人胚胎滋养分离纯化共聚膜壳聚糖温敏性细胞脱附特异性结合细胞存活率表面分子蛋白抗体分离方式抗体蛋白细胞悬液循环方式洗脱液预分离再利用抗体流式胎盘吸附递减种植

[发明专利]一种利用自体脂肪干细胞制备治疗膝关节炎的干细胞药物-CN201810894241.3在审
发明人：夏凡;张洁 -专利权人： 广州杜德生物科技有限公司
申请日： 2018-08-08 - 公布日： 2018-11-30 - 主分类号： A61K38/38 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用自体脂肪干细胞制备治疗膝关节炎的干细胞药物，利用自体脂肪干细胞诱导分化成软骨细胞，并与一定比例的磁性纳米微球、红景天苷、绞股蓝提取物、泼尼松、杜仲提取物、苍术提取物、生地黄提取物、海桐皮提取物、冬凌草提取物、混合支架等组成自体脂肪干细胞药物，再将自体脂肪干细胞药物通过注射液的形式注射到膝关节病灶处。总之，本发明所制备的自体脂肪干细胞药物药效好，疗效高，能够有效的修复关节软骨、恢复关节结构和功能。
自体脂肪干细胞药物制备膝关节炎干细胞分化成软骨细胞磁性纳米微球冬凌草提取物绞股蓝提取物生地黄提取物修复关节软骨苍术提取物杜仲提取物干细胞诱导膝关节病灶关节结构红景天苷混合支架海桐皮泼尼松提取物注射液治疗注射恢复

[发明专利]级联激活的免疫细胞、制备方法以及应用-CN201510074131.9有效
发明人：邹汉东;于兆学;夏凡 -专利权人： 广州杜德生物科技有限公司
申请日： 2015-02-11 - 公布日： 2018-08-03 - 主分类号： C12N5/0786 文献下载
摘要：本发明提供一种级联激活的免疫细胞、制备方法以及应用，所述制备方法包括以下步骤：分离得到单核细胞；进行培养，加入CD3抗体和干扰素γ，初级刺激单核细胞，进入初级刺激孵育期，培养；加入IL‑2、IL‑4、IL‑1和巨噬细胞集落刺激因子,进一步活化培养，得到活化后的外周血单核细胞。通过上述方法得到的活化后的外周血单核细胞，可用于制备治疗乳腺癌、恶性黑色素瘤的药物。
级联激活免疫细胞制备方法以及应用