本发明公开了一种利用聚乙二醇马来酰亚胺衍生物构建的酶组装体及其制备方法和应用，本发明方法包括：将聚乙二醇马来酰亚胺衍生物与酶交联，获得酶组装体；其中：所述酶由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列单一突变所得，所述单一突变是用半胱氨酸残基的置换。本发明还涉及了由该方法构建得到的酶组装体及其应用。本发明通过简单高效的方法实现了蛋白质在特定位点的组装，成功制备了相对空间定位可控的酶组装体。采用本发明方法形成的酶组装体能够在基本不影响酶活性的基础上，进一步提高酶的热稳定性。
本发明公开了聚磷酸依赖型葡萄糖激酶在五环三萜化合物糖基化修饰中的应用，所述糖基化修饰的糖基供体为蔗糖，所述聚磷酸依赖型葡萄糖激酶用于将副产物果糖转化成果糖‑6‑磷酸，所述聚磷酸依赖型葡萄糖激酶为氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的CgPPGK或氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的Asp‑PPGK。本发明将聚磷酸依赖型葡萄糖激酶CgPPGK或Asp‑PPGK偶联到传统的UDP‑葡萄糖再生体系中，构成偶联三酶的UDP‑葡萄糖再生体系，实现果糖的消耗，使反应产生更多的UDP‑葡萄糖，提高了糖基化效率和蔗糖利用率，对于底物的糖基化修饰能力明显高于原有传统的UDP‑葡萄糖再生体系。
本发明公开了一种由启动子、核酸序列SEQ ID NO.1、及终止子依次相连构成的基因表达盒，插入该基因表达盒的表达载体和利用该基因表达盒制备产生两株高细胞活力的多重抗逆性酵母菌株。通过上述技术方案，利用本发明中的基因表达盒转化酿酒酵母实现了泛素蛋白酶体的精细改造，发明了一种能够同时提高酿酒酵母细胞活力与多重抗逆性的方法和应用，所获得的酿酒酵母工程菌株的遗传性能稳定，在工业发酵中有广泛用途和应用前景。
