本发明公开了一种表达和生产白喉毒素无毒突变蛋白的方法及其使用的特异DNA分子，白喉毒素无毒突变蛋白即CRM197蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明提供的方法可以在周质中产生CRM197蛋白，与胞内产生CRM197蛋白相比，周质产生CRM197蛋白具有如下优势：切割信号肽后，蛋白以其成熟形式产生；大肠杆菌的周质是氧化环境，其允许形成二硫键，这可帮助产生可溶性、正确折叠的蛋白；周质含有较少的蛋白，可以获得更纯的CRM197蛋白。此外，本发明在周质中产生的CRM197蛋白比现有技术中在周质中产生的CRM197蛋白的表达量高，即获得了较高得率的CRM197蛋白。本发明具有重要的应用价值。
