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- [发明专利]一种分离鸡胚生殖嵴来源的原始生殖干细胞方法-CN201711034939.X在审
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李碧春;靳锴;左其生;张亚妮
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扬州大学
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2017-10-30
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2018-03-09
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C12N5/0735
- 本发明公开了一种分离鸡胚生殖嵴来源的原始生殖干细胞方法，属于生物技术领域，包括以下步骤（1）无菌取出21‑24HH早期胚胎，使用PBS浸洗3次；（2）在解剖显微镜下去头尾，剥离出生殖嵴，获取早期生殖嵴组织，使用PBS浸洗3次；（3）加入预热的胰蛋白酶进行消化，室温消化5mins，消化时轻轻吹打使生殖嵴组织分散；（4）加入含有小牛血清的培养基终止消化，100目网筛过滤后300转离心5mins，弃上清后使用PGCs培养基进行重悬，重悬后进行差速贴壁培养，培养45mins后吸上清，连续差速贴壁培养3次后即可得到纯度较高的PGCs。本发明提取简便快速，旨在从早期生殖嵴（21‑24HH）中分离大量纯净且全能性高的PGCs，为PGCs的应用奠定基础。
- 一种分离生殖来源原始干细胞方法
- [发明专利]一种外源物质导入鸡胚的方法-CN201711031012.0在审
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李碧春;靳锴;左其生;张亚妮
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扬州大学
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2017-10-30
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2018-02-23
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C12N15/89
- 本发明公开了一种外源物质导入鸡胚的方法，属于生物技术领域，具体包括如下步骤（1）对孵育48‑58h的13‑17 HH早期胚蛋在无菌条件下开口，找到胚胎位置，剥去胚蛋外壳膜，露出胚胎血管；（2）将需要导入的外源物质注入到玻璃注射针中，通过显微注射仪注射到鸡胚血管中；（3）注射后加入青链霉素至注射部位，然后使用医用胶带封口。本发明旨在鸡胚早期（13‑17 HH）通过血管注射导入外源物质，为鸡胚注射的广泛应用奠定基础。本方法适用于鸡胚外源基因或细胞导入，转基因鸡和嵌合体制备，操作简便快速，外源物质导入效率高。
- 一种物质导入方法
- [发明专利]一种鸡胚蛋性别快速鉴定方法-CN201710049896.6在审
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李碧春;靳锴;左其生
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扬州大学
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2017-01-23
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2017-06-13
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C12Q1/68
- 本发明公开了一种新的鸡胚蛋性别快速鉴定方法种蛋孵化至16、17或18日龄，通过1ml注射器于胚蛋尖端无菌获取尿囊液（10μL），取样后石蜡封口进行正常孵化；以取得的尿囊液为模板，设计CDH‑W特异性引物进行PCR扩增，通过凝胶电泳检测扩增产物并进行性别鉴定雄性扩增为双带（600bp和450bp），雌性为单带（450bp）；正常孵化出雏后统计孵化率和死亡率并与对照组进行生物统计学分析；对比性别鉴定的结果和出雏后仔鸡的剖检结果，进行关联分析，统计性别鉴定的准确率（准确率达99%，视为100%有效）。
- 一种鸡胚蛋性别快速鉴定方法
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