本发明提供了一种恶性疟原虫(P.falciparum)RIFIN多肽8‑RIFIN及其衍生产品和应用,属于生物蛋白质工程技术领域。本发明提供的恶性疟原虫RIFIN多肽8‑RIFIN,氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,来自于恶性疟原虫3D7的RIFIN基因PF3D7_0900200编码的位于243~267aa的RIFIN肽段。多肽8‑RIFIN不仅具有较好的可特异性识别感染恶性疟病人全血的能力,且能够结合免疫抑制性受体LILRB1,这表明本发明的多肽是恶性疟原虫RIFIN蛋白与LILRB1结合的关键区域,为进一步研究恶性疟原虫利用RIFIN蛋白进行免疫逃避的分子机制打下基础。
本发明提供了一种由恶性疟原虫RIFIN基因PF3D7_0833400编码的恶性疟原虫RIFIN重组蛋白,其基因序列如SEQ ID NO.1所示,氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明还提供了一种含有基因PF3D7_0833400的重组质粒和含有蛋白PfRIFIN‑55的蛋白芯片。还公开了该种恶性疟原虫RIFIN重组蛋白的制备方法。与对照PfMSP1‑42相比,本发明的蛋白不仅具有较好的可特异性识别感染恶性疟原虫病人血清的能力,且对被恶性疟原虫感染的重症和非重症患者血清免疫反应表现出明显的差异,对重症患者血清的免疫反应阳性率明显低于对非重症患者血清免疫反应的阳性率。
本发明一种由恶性疟原虫RIFIN基因PF3D7_0833100编码的恶性疟原虫RIFIN重组蛋白,命名为PfRIFIN‑54,其基因序列如SEQ ID No.1所示,氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。一种含有基因PF3D7_0833100的重组质粒。一种含有蛋白PfRIFIN‑54的蛋白芯片。本发明还公开了该种恶性疟原虫RIFIN重组蛋白的制备方法。与对照PfMSP1‑42相比,本发明的蛋白不仅具有较好的可特异性识别感染恶性疟原虫病人血清的能力,且对被恶性疟原虫感染的重症和非重症患者血清免疫反应表现出明显的差异,对重症患者血清的免疫反应阳性率明显低于对非重症患者血清免疫反应的阳性率。
本发明公开了一种鉴定恶性疟原虫Pfmspdbl2基因多态性的引物及方法,包括上游引物(如SEQ ID NO:1所示)和下游引物(如SEQ ID NO:2所示)。根据基因多态性区域特征,设计特定的引物,经PCR扩增得到包含保守区域和多态性区域的DNA片段,通过测序、分析,能够对Pfmspdbl2基因是否突变进行鉴定,进而区分出是野生型还是突变型。
本发明公开了一种鉴定间日疟原虫PvMSP‑3α基因多态性的引物及方法,包括上游引物(如SEQ ID NO:1所示)和下游引物(如SEQ ID NO:2所示)。根据基因多态性区域特征,设计特定的引物,经PCR扩增得到包含保守区域和多态性区域的DNA片段,通过测序、分析,能够对PvMSP‑3α基因是否突变进行鉴定,进而区分出是野生型还是突变型。此外,本发明还公开了该鉴定间日疟原虫PvMSP‑3α基因多态性的特异性引物在制备鉴定间日疟原虫PvMSP‑3α基因多态性的检测工具中的应用。
本发明公开了一种日本血吸虫无机焦磷酸酶(SjPPase)重组抗原蛋白在日本血吸虫病疗效考核中的应用,属于免疫学领域。日本血吸虫SjPPase重组抗原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO1所示,是可以催化无机焦磷酸盐(PPi)水解生成磷酸盐的蛋白。本发明首次提出将SjPPase重组蛋白应用于日本血吸虫病诊断,不仅可以用于诊断日本血吸虫病,而且可以进行疗效考核,具有广阔的市场空间和较好的社会、经济效益。
本发明公开了一种日本血吸虫无机焦磷酸酶(SjPPase)重组抗原蛋白,是可以催化无机焦磷酸盐(PPi)水解生成磷酸盐的蛋白(其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)。本发明还公开了上述重组抗原蛋白的制备方法,包括日本血吸虫SjPPase编码基因序列的扩增、重组质粒的构建和鉴定、重组蛋白的诱导表达和纯化步骤。此外,本发明还公开了日本血吸虫SjPPase重组抗原蛋白在筛选SjPPase抑制剂中的应用。
本发明公开了一种田鼠巴贝虫Bm7重组抗原蛋白,具有SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的蛋白、或由该蛋白发生一个或多个氨基酸的置换、缺失或插入而形成的具有相同功能的蛋白。此外,本发明还公开了该田鼠巴贝虫Bm7重组抗原蛋白的制备方法,包括田鼠巴贝虫Bm7基因序列的扩增、田鼠巴贝虫Bm7重组质粒的构建和鉴定、重组蛋白的诱导表达和纯化等步骤。此外,本发明还公开了该田鼠巴贝虫Bm7重组抗原蛋白在制备检测田鼠巴贝虫病患者(动物或人)血清抗体的试剂或试剂盒中的应用。经验证,本发明田鼠巴贝虫Bm7重组抗原蛋白用于田鼠巴贝虫病的诊断具有较高的敏感性和特异性,是潜在的诊断候选靶标,可作为田鼠巴贝虫病诊断的目的抗原。
本发明公开了一种间日疟原虫PvMSP1重组抗原蛋白,是具有糖基化磷脂酰肌醇(glycophosphatidylinositol,GPI)锚定及表皮生长因子样(epidermal growth factor-like,EGF-like)结构域的蛋白(其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)。此外,本发明还公开了上述重组抗原蛋白的制备方法,包括间日疟原虫PvMSP1基因序列的扩增、重组质粒的构建和鉴定、重组蛋白的诱导表达和纯化等步骤。实验证明,本发明的PvMSP1重组抗原蛋白对间日疟原虫感染病人血清抗体的检测具有敏感性高和特异性强等优点,在间日疟血清流行病学调查方面具有广泛的应用前景。
本发明公开了一种日本血吸虫含EF-hand结构域钙结合蛋白(SjEFCAB)重组抗原蛋白的制备方法,包括设计SEQ ID NO.3或其互补链为5′引物,SEQ ID NO.4或其互补链为3′引物,进行日本血吸虫SjEFCAB基因序列的扩增;日本血吸虫SjEFCAB重组质粒的构建和鉴定;重组蛋白的诱导表达和纯化等步骤。此外,本发明还公开了采用上述方法制得的日本血吸虫SjEFCAB重组抗原蛋白在制备检测日本血吸虫病患者血清抗体的产品中的应用。经过酶联免疫吸附试验(ELISA)的验证,本发明的日本血吸虫SjEFCAB重组抗原蛋白用于日本血吸虫病的诊断具有较高的敏感性和特异性,是潜在的诊断候选靶标,可以作为日本血吸虫病诊断的目的抗原。
本发明公开了一种日本血吸虫含鞘脂激活蛋白B结构域蛋白(SjSap)重组抗原蛋白,具有SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的蛋白、或由该蛋白发生一个或多个氨基酸的置换、缺失或插入而形成的具有相同功能的蛋白。此外,本发明还公开了该日本血吸虫SjSap重组抗原蛋白的制备方法,包括日本血吸虫SjSap基因序列的扩增、日本血吸虫SjSap重组质粒的构建和鉴定、重组蛋白的诱导表达和纯化等步骤。此外,本发明还公开了该日本血吸虫SjSap重组抗原蛋白在检测日本血吸虫病人血清抗体中的应用。经过酶联免疫吸附试验(ELISA)的验证,本发明的日本血吸虫SjSap重组抗原蛋白用于日本血吸虫病的诊断具有较高的敏感性和特异性,是潜在的诊断候选靶标,可以作为日本血吸虫病诊断的目的抗原。
本发明公开了一组日本血吸虫可溶性虫卵抗原中的免疫原性蛋白,该免疫原性蛋白选自SEQ ID NO:2-SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列。此外,本发明还公开了上述日本血吸虫可溶性虫卵抗原中的免疫原性蛋白的筛选方法和用途,主要通过联合蛋白质组学技术和血清学方法筛选日本血吸虫可溶性虫卵抗原中的免疫原性蛋白,具体涉及利用双向电泳、Westernblot(2D-WB)以及质谱的方法分析日本血吸虫可溶性虫卵抗原中的免疫原性蛋白,并以此作为日本血吸虫病诊断的潜在靶点。