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[发明专利]制备用于细胞分选的链霉亲和素偶联微泡冻干制剂的方法-CN201910678276.8有效
发明人： 许晓椿;魏卿;肖海蓉;牛翰婕;赵梦莲;刘庆喜 -专利权人：深圳博雅感知药业有限公司
申请日： 2019-07-25 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N5/0781 文献下载
摘要：本发明涉及制备用于细胞分选的链霉亲和素偶联微泡冻干制剂的方法，包括步骤：使磷脂和脂肪酸用有机溶剂溶解，接着旋转蒸发除溶剂，真空干燥；向烧瓶中加水，超声波振荡使形成混悬液；混悬液加聚乙二醇，混匀，加链霉亲和素，室温孵育；将混悬液分装到玻璃瓶中，用胶塞将玻璃瓶半加塞，抽真空、冷冻、升华、干燥，压塞密封；通过针头穿刺胶塞向密塞玻璃瓶内充入包埋气体，得到冻干制剂，其可用于从外周血简易、快速、高效地分离获取免疫细胞、造血干细胞等目标细胞，避免现有磁珠法的磁珠残留、流式分选引入荧光素的弊端等问题，不需要昂贵的仪器设备、成本低、并且对所结合的靶细胞毒性极小、不易使之失活；分选出的细胞纯度、活力高。
制备用于细胞分选亲和素偶联微泡冻干制剂方法

[发明专利]用于细胞分选的链霉亲和素偶联微泡的液体制剂-CN201910678274.9有效
发明人： 许晓椿;魏卿;肖海蓉;赵梦莲;刘庆喜 -专利权人：深圳博雅感知药业有限公司
申请日： 2019-07-25 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N5/0781 文献下载
摘要：本发明涉及用于细胞分选的链霉亲和素偶联微泡的液体制剂，其为一种存在于水性载体液中的充气微泡悬浮液，其中的微泡与链霉亲和素偶联，微泡直径小于10μm，每1mL充气微泡悬浮液多达10^8个微泡的链霉亲和素偶联微泡，每1mL充气微泡悬浮液中微泡内的包埋气体量为1～200ug。还涉及该液体制剂在从外周血中分离目标细胞的方法中作为分离试剂的用途。液体制剂用于从外周血中分离目标细胞的方法如说明书所详述的，其可从外周血简易、快速、高效地分离获取免疫细胞、造血干细胞等目标细胞，避免现有磁珠法的磁珠残留、流式分选引入荧光素的弊端等问题，不需要昂贵的仪器设备、成本低、并且对所结合的靶细胞毒性极小、不易使之失活；分选出的细胞纯度、活力高。
用于细胞分选亲和素偶联微泡液体制剂

[发明专利]分泌表达PD-1、GM-CSF抗体的CAR-T细胞及其用途-CN202210040555.3有效
发明人：肖海蓉;许晓椿;刘庆喜;魏卿;任倩影 -专利权人：深圳博雅感知药业有限公司
申请日： 2022-01-14 - 公布日： 2023-08-22 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及分泌表达PD‑1、GM‑CSF抗体的CAR‑T细胞及其用途。具体地说，一方面，本发明涉及一种嵌合抗原受体，包括：作为第一信号的抗原结合结构域、跨膜结构域、作为第二信号的细胞内传导结构域、以及分泌中和PD‑1、GM‑CSF的anti‑PD‑1、anti‑GM‑CSF scFv的第四信号域。本发明还涉及一种重组质粒，一种能够分泌表达IL‑7、CCL17因子和/或PD‑1、GM‑CSF抗体的CAR‑T细胞，这些CAR‑T细胞的制备方法以及它们在制备用于治疗肿瘤的细胞治疗剂中的用途。本发明细胞治疗剂具有如说明书所述优良技术效果。
分泌表达 pd gm csf 抗体 car 细胞及其用途

[发明专利]牛胚胎分割的方法-CN202110511512.4有效
发明人：韩勇权;王小武;王娜;陈建美;郭春明;许晓椿 -专利权人：天津力牧生物科技有限公司
申请日： 2021-05-11 - 公布日： 2023-08-15 - 主分类号： A61D19/00 文献下载
摘要：本发明涉及牛胚胎分割的方法，包括如下步骤：采集卵母细胞并使其进行体外成熟；使精子悬液与成熟的卵母细胞在受精培养液滴孵育以完成体外受精；体外受精操作完毕后使胚胎在胚胎培养液中培养至桑椹胚生长良好，显微镜下挑选出桑椹胚；制作分割液滴；将桑椹胚移入分割液滴内，置于倒置显微镜下，用固定管固定住胚胎，用分割刀逐渐由上向下压胚胎将胚胎一分为二；将分割所得半胚移入胚胎培养液中培养，至桑椹胚发育成可用于胚胎移植的扩张囊胚，所述分割液包含磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、蔗糖、聚维酮等。本发明方法和所用的分割液呈现如说明书所述优异技术效果。
胚胎分割方法

[发明专利]CD19-CAR-T细胞及其制备方法-CN202111157897.5有效
发明人： 许晓椿;肖海蓉;刘庆喜;魏卿;赵梦莲;房帅 -专利权人：深圳博雅感知药业有限公司
申请日： 2021-09-30 - 公布日： 2023-08-15 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及CD19‑CAR‑T细胞及其制备方法。一方面，本发明涉及一种编码的嵌合抗原受体，包括作为第一信号的抗原结合结构域、跨膜结构域、作为第二信号的细胞内传导结构域、表达IL‑7和CCL‑17细胞因子的第三信号域、以及分泌中和PD‑1、GM‑CSG的anti‑PD‑1、anti‑GM‑CSF scFv的第四信号域。另一方面，本发明涉及一种CAR‑T细胞，其能够分泌表达IL‑7、CCL17因子和/或PD‑1、GM‑CSF抗体。另一方面，本发明涉及制备CAR‑T细胞的方法，以及它们治疗肿瘤的用途。
cd19 car 细胞及其制备方法

[发明专利]胎盘间充质干细胞制剂及其治疗硬化病的用途-CN201811568534.9有效
发明人： 许晓椿;李容;肖海蓉;刘冰 -专利权人：博雅干细胞科技有限公司
申请日： 2018-12-21 - 公布日： 2023-05-05 - 主分类号： A61K35/28 文献下载
摘要：本发明涉及胎盘间充质干细胞制剂及其治疗硬化病的用途。具体地说，本发明一方面涉及一种细胞制剂，其是通过使间充质干细胞例如胎盘间充质干细胞混悬于0.9％氯化钠溶液中配制成的细胞混悬液，具体是通过包括方法制得的：将细胞传代所得间充质干细胞转移至离心管中，离心，弃上清，加入0.9％氯化钠溶液重悬，制得细胞制剂。本发明还涉及所述细胞制剂在制备用于治疗和/或预防系统性硬化病的药物中的用途。本发明还涉及制备所述细胞制剂及其所用胎盘间充质干细胞的方法以及其中所用到的混合酶消化液。本发明制得的细胞制剂在治疗硬化病方面呈现优异的生物学效应。
胎盘间充质干细胞制剂及其治疗硬化用途

[发明专利]无血清驯化培养间充质干细胞的方法和所用的培养基-CN202010980501.6有效
发明人：肖海蓉;魏卿;许晓椿;刘庆喜 -专利权人：深圳博雅感知药业有限公司
申请日： 2020-09-17 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明涉及无血清驯化培养间充质干细胞的方法和所用的培养基。一方面涉及3‑(2‑甲氧基苯氧基)‑1,2‑丙二醇和镁的组合在制备用于无血清驯化培养间充质干细胞的驯化培养基中的用途，所述驯化培养基中包含：转铁蛋白8～12ng/mL、胰岛素8～12ng/mL、3‑(2‑甲氧基苯氧基)‑1,2‑丙二醇0.08～0.12mg/mL等以及平衡量的DMEM/F12培养基。本发明还涉及无血清驯化培养间充质干细胞的方法；还涉及用于无血清驯化培养间充质干细胞的驯化培养基；还涉及制备无血清驯化培养间充质干细胞的驯化培养基的方法，该方法包括向DMEM/F12培养基添加转铁蛋白、胰岛素、胎牛血清或其它物质的步骤。本发明方法呈现说明书所述优良效果。
血清驯化培养间充质干细胞方法所用培养基

[发明专利]提高牛胚胎移植同期发情效果的方法和所用的药物-CN202010466900.0有效
发明人：郝少强;王小武;赵明礼;王娜;郭春明;许晓椿 -专利权人：天津力牧生物科技有限公司
申请日： 2020-05-28 - 公布日： 2022-09-09 - 主分类号： A61K38/09 文献下载
摘要：本发明公开了提高牛胚胎移植同期发情效果的方法和所用的药物，具体提供了促黄体素释放激素A3在制备用于提高牛胚胎移植同期发情效果的药物组合物中的用途，提高牛胚胎移植同期发情效果的方法步骤：提供供体牛；对供体牛肌肉注射药物；从注射药物起连续观察3d内母牛的发情、排卵情况，记录母牛开始出现发情时间和发情结束时间，每天早晚各观察一次，并以母牛外观发情征状，结合直肠检查来确定发情时间、发情程序及排卵状况，以注射药物后3d内表现发情的判断为发情同期化，并对发情排卵的母牛，按冻配技术操作规程适时进行人工授精，精液为同种供体牛的冻精；以配种后90d，直肠检查结果为依据确定母牛是否怀孕，并按常规方法进行孕期饲养。
提高胚胎移植同期发情效果方法所用药物

[实用新型]一种液氮冻存罐用的冻存架-CN201820806010.8有效
发明人：王小武;郭晶;王娜;迟大明;朱春颖;王佳;郭春明;许晓椿 -专利权人：天津力牧生物科技有限公司;天津中科博雅生物育种研究有限公司;天津力牧鼎丰生物技术有限公司
申请日： 2018-05-29 - 公布日： 2022-08-26 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种液氮冻存罐用的冻存架。具体地，所述冻存架包括由顶板、底板、左侧板和右侧板以及后板围覆形成的框体，框体中部横向设置有横向隔板，横向隔板将冻存架上下两部分分开形成上下两个容置单元格，容置单元格的前侧为存取冻存盒的开口，并且框体的前侧还设置有档棒，该档棒通过可以安装和卸除的方式自框体顶至框体底依次贯穿顶板、横向隔板、底板；在横向隔板与左侧板或右侧板的交接处，以可旋转的方式设置有用于锁固容置单元格的转动锁止块；所述转动锁止块呈半圆形。所述冻存装置包括冻存架和冻存盒。本申请设计具有结构简单，体积较小，存放稳固，方便存取的优点。
一种液氮冻存罐用冻存架

[发明专利]改进牛卵母细胞体外成熟的方法-CN202010250266.7有效
发明人：郭晶;王小武;王娜;张月桥;郝少强;赵明礼;郭春明;许晓椿 -专利权人：天津力牧生物科技有限公司
申请日： 2020-04-01 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： C12N5/075 文献下载
摘要：本发明涉及改进牛卵母细胞体外成熟的方法，具体地说，本发明涉及的牛卵母细胞体外成熟的方法包括如下步骤：(1)提供卵母细胞；(2)卵母细胞的体外成熟：使所述卵母细胞移入成熟培养液滴中，进行体外成熟培养，培养条件为100％湿度、38.5℃、5％CO2，体外成熟培养22～24h。所述成熟培养液包含：ECS、NaHCO3、EGCG、Hepe、雌二醇、BFF、黄体生成素、半胱氨酸、FSH(卵泡刺激素)、TCM‑199。本发明方法可以有效进发进牛卵母细胞体外成熟的性能。
改进牛卵母细胞体外成熟方法

[发明专利]提高牛体外受精效率的方法-CN202110010706.6有效
发明人：王娜;王小武;郝少强;赵明礼;韩勇权;郭春明;许晓椿 -专利权人：天津力牧生物科技有限公司
申请日： 2021-01-06 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： C12N5/075 文献下载
摘要：本发明涉及提高牛体外受精效率的方法。一方面，涉及牛体外受精胚胎培养的方法，包括如下步骤：卵母细胞的采集和体外成熟，使用受精培养液和精液制备培养液进行体外受精，胚胎体外培养及保存。该方法中使用到的成熟培养液是添加了100mL/L FBS、10μg/mL FSH、10μg/mL LH、1μg/mL E2、20ng/mL EGF的BY基础培养液，使用到的受精培养液和精液制备培养液中均包含丙酮酸钠、肝素和牛血清白蛋白。本发明还涉及牛体外受精的方法，还涉及这些方法中使用的受精培养液和精液制备培养液。使用了本发明试剂的本发明方法呈现优异的技术效果例如显著提高体外受精的效率。
提高体外受精效率方法

[发明专利]改进牛体外受精囊胚冻存和解冻的方法-CN202110495267.2有效
发明人：韩勇权;王小武;王娜;郝少强;赵明礼;郭春明;许晓椿 -专利权人：天津力牧生物科技有限公司
申请日： 2021-05-07 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明涉及改进牛体外受精囊胚冻存和解冻的方法。具体的，一方面，牛体外受精胚胎培养和冻存的方法其包括如下步骤：卵母细胞的采集和体外成熟；体外受精；胚胎体外培养、保存和解冻。其中，在体外受精操作完毕后，将胚胎放入胚胎培养液中培养，然后转移入冷冻液，按5段装液法装入胚胎，再放入程序降温仪中降温至‑35℃后，将胚胎细管迅速取出，置入液氮中冷冻保存；在需要使用冷冻保存的胚胎时，从液氮中取出细管，在空气中停留5s，放入37℃水浴中，待冰晶全部融化为止，剪开细管，将胚胎迅速移入解冻液中，将胚胎放入胚胎培养液小滴内培养，完成解冻过程。还涉及所述方法所用的冷冻液和解冻液。本发明方法能够显著提高牛体外受精的效率。
改进体外受精囊胚解冻方法

[发明专利]牛卵母细胞体外成熟方法和所用的成熟液-CN202010250267.1有效
发明人：郭晶;王小武;王娜;张月桥;郝少强;赵明礼;郭春明;许晓椿 -专利权人：天津力牧生物科技有限公司
申请日： 2020-04-01 - 公布日： 2022-05-20 - 主分类号： C12N5/075 文献下载
摘要：本发明涉及牛卵母细胞体外成熟方法和所用的成熟液，具体地说，本发明成熟培养液的组成为：发情牛血清、碳酸氢钠、EGCG、Hepe、雌二醇、牛卵泡液、黄体生成素、半胱氨酸、卵泡刺激素、TCM‑199。本发明提供的牛卵母细胞体外成熟的方法包括如下步骤：提供卵母细胞；使所述卵母细胞移入成熟培养液滴中，进行体外成熟培养22～24h。本发明方法可以显著地改善卵母细胞的生物学性能，例如卵母细胞成熟过程中卵丘扩展性能、卵母细胞第一极体的排出性能、卵母细胞成熟及成熟质量、卵母细胞受精能力、卵母细胞的核成熟和早期胚胎发育能力等方面显著更优异。
牛卵母细胞体外成熟方法所用

[发明专利]提高牛体外受精效率的方法和所用的冻存液和解冻液-CN202110494596.5有效
发明人：王娜;王小武;韩勇权;郝少强;赵明礼;郭春明;许晓椿 -专利权人：天津力牧生物科技有限公司
申请日： 2021-05-07 - 公布日： 2022-05-13 - 主分类号： C12N5/076 文献下载
摘要：本发明涉及提高牛体外受精效率的方法和所用的冻存液和解冻液。其中牛体外受精胚胎培养的方法包括如下步骤：(1)卵母细胞的离体采集或活体采集以及卵母细胞体外成熟，(2)使精子悬和卵母细胞共孵育进行体外受精，(3)胚胎体外培养、保存和解冻，使胚胎置液氮中冷冻保存以及在需要时使胚胎进行解冻。还涉及冷冻液和解冻液，它们包含PBS、FBS、乙二醇、蔗糖等。本发明方法和所用的冻存液和解冻液呈现如说明书所述优异的技术效果。
提高体外受精效率方法所用冻存液解冻

[发明专利]提高牛胚胎移植中受体牛可用率的方法-CN202010467616.5有效
发明人：郝少强;王小武;赵明礼;王娜;郭春明;许晓椿 -专利权人：天津力牧生物科技有限公司
申请日： 2020-05-28 - 公布日： 2022-05-10 - 主分类号： A61D19/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高牛胚胎移植中受体牛可用率的方法。本发明通过使用母牛注射促黄体素释放激素A3，可以获得如本发明所述一个或者多个方面的技术效果。本发明方法包括如下步骤：(1)提供供体牛；(2)对供体牛肌肉注射促黄体素释放激素A3；(3)从注射药物起连续观察3d内母牛的发情、排卵情况，记录母牛开始出现发情时间和发情结束时间，每天早晚各观察一次，并以母牛外观发情征状，结合直肠检查来确定发情时间、发情程序及排卵状况，以注射药物后3d内表现发情的判断为发情同期化，并对发情排卵的母牛，按冻配技术操作规程适时进行人工授精，精液为同种供体牛的冻精；(4)以配种后90d，直肠检查结果为依据确定母牛是否怀孕，按常规方法进行孕期饲养。
提高胚胎移植受体可用方法

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