本发明公开了纳米银在制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)药物中的应用，纳米银抗PRRSV主要表现为对PRRSV毒株的灭活作用，抑制毒株对细胞粘附、入侵以及抑制病毒的增殖。本方案通过CCK8法评估纳米银对Marc145细胞的毒性效应，使用安全浓度范围纳米银预处理细胞后感染PRRSV，通过显微观察、间接免疫荧光、滴度测定、qRT‑PCR方法评估纳米银对病毒感染细胞的抑制效果，通过评估纳米银对病毒直接灭活作用以及在病毒感染细胞繁殖周期包括粘附、入侵和增殖中的作用，进一步分析纳米银抗病毒的机制，证明低浓度纳米银对细胞无影响，安全浓度范围内纳米银具有良好体外抗PRRSV活性，对制备预防和治疗该病的药物提供较好的基础。
本发明公开了一种可促进伪狂犬病毒增殖的猪源MLKL基因缺失细胞株及其应用，属于生物技术领域。本发明公开了用于敲除猪源MLKL基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA包括sgRNA1和sgRNA2，所述sgRNA1的引物序列如SEQ ID NO：1‑2所示；所述sgRNA2的引物序列如SEQ ID NO：3‑4所示。利用上述的sgRNA引物以及CRISPR/Cas9载体构建敲除猪源MLKL基因，再采用有限稀释法对所得的敲除猪源MLKL基因的猪肾上皮细胞进行传代、筛选，得到猪源MLKL基因缺失细胞株，将其接种伪狂犬病毒后，该细胞株与正常猪肾上皮细胞相比能持续促进病毒增殖。
本发明公开了检测非洲猪瘟病毒的锁核酸修饰的一步巢式PCR引物组、试剂盒，涉及分子生物领域；包括外引物对、内引物对和探针，所述外引物对的上游引物序列为SEQ ID NO：1所示序列，所述外引物对的下游引物序列为SEQ ID NO：2所示序列；所述内引物对的上游引物序列为SEQ ID NO：3所示序列，所述内引物对的下游引物序列为SEQ ID NO：4所示序列；所述探针的序列为SEQ ID NO：5所示序列。本发明基于巢式PCR原理，通过设计两对嵌套式引物，同时对外引物进行锁核酸修饰，提高外引物的Tm值和稳定性，进行两次独立的循环镶套式扩增，具有较高的灵敏度和特异性，易于操作，交叉污染少。
