本发明涉及无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白及其制备方法与应用,所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,所述重组蛋白的编码基因的序列如SEQ ID NO:1所示;所述重组蛋白的制备方法即将所述的重组蛋白的编码基因构建到表达载体上,获得重组表达载体;将重组表达载体转化宿主细胞,培养转化的宿主细胞,使转化的宿主细胞表达产生所述无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白,之后回收并纯化所表达的无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白;所述重组蛋白在制备罗非鱼抗无乳链球菌感染的疫苗中的应用。一种罗非鱼口服纳米疫苗是以所述的无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白作为抗原;本发明的纳米疫苗对罗非鱼具有良好的免疫保护效果。