本发明属于作物分子生物学技术领域,公开了一种小麦TaB3‑like‑A基因及其应用,所述小麦TaB3‑like‑A基因位于小麦第一同源群上,在小麦1A同源染色体的序列如SEQ ID NO.1所示,在小麦1B同源染色体的序列如SEQ ID NO.2所示,在小麦1D同源染色体的序列如SEQ ID NO.3所示。本发明实验发现小麦B3‑like‑A基因突变后,植株表现为株高显著降低。本发明的小麦TaB3‑like‑A基因可广泛应用于小麦遗传育种、种质资源改良和培育编辑TaB3‑like基因的植物领域,对改进和改良小麦等作物种质资源具有重要作用。
本发明提供了小麦TaARF12基因及其应用,属于作物分子生物学领域。本发明设计引物从中国春幼穗的cDNA中克隆TaARF12的编码区序列,TaARF12基因编码区序列在A、B、D同源染色体中的序列分别如SEQ ID NO.1‑3所示。本发明选择TaARF12特异性的RNAi片段,构建RNAi载体并转化Fielder。同时,使用CRISPR/Cas9载体构建包含两个靶位点的基因编辑载体并转化野生型Fielder。获得的RNAi转基因株系和基因编辑株系具有类似的表型,表现为株高变矮,穗子变长。说明小麦TaARF12基因能够调控植株高度和穗子长度,该基因被干扰表达后植株表现为植株变矮,穗子增长。
本发明提供了小麦TaAGO4a基因的CRISPR‑Cas9载体及其应用,属于作物分子生物学领域。本发明首先提供了特异性靶向TaAGO4a第三个外显子的gRNA,其DNA序列如SEQ ID NO.1所示,包含一个酶切位点XmnI,本发明接着提供了含有该gRNA的CRISPR‑Cas9载体,通过共转化Cas9和该特异性gRNA到小麦原生质体中,利用酶切和测序技术,成功检测到该gRNA可以引导Cas9切割分别位于TaAGO4a染色体3A、3B和3D上的三个拷贝,从而引起该基因发生移码突变,致使其功能缺失或部分缺失,可用于制备TaAGO4a基因缺失的转基因小麦。
本发明提供了小麦TaSPL6基因及其应用,属于作物分子生物学领域。本发明设计特异性引物从中国春小麦叶的cDNA中克隆TaSPL6的编码区序列,利用缺体四体将TaSPL6定位在小麦第五同源群上,TaSPL6基因编码区序列在A、B、D同源染色体中的序列分别如SEQ ID NO.1‑3所示。本发明通过将TaSPL6基因转化拟南芥,发现该基因能够使拟南芥叶片增大、生物量增加。
本发明公开了一种小麦TaAGO4a‑D蛋白及其编码基因,其中,所述TaAGO4a‑D蛋白为(1)SEQ ID No.3所示的氨基酸序列组成的蛋白质;(2)SEQ ID No.3所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等功能的由(1)衍生的蛋白质。本发明还提供了小麦TaAGO4a‑D抗原多肽和小麦TaAGO4a‑D抗体。本发明还提供了所述TaAGO4a‑D抗体的特异性。本发明在小麦中利用TaAGO4a‑D抗体可以特异结合24nt的小分子RNA;在水稻中过表达TaAGO4a‑D基因可明显增加转基因水稻对白叶枯病的抗性,可用于解决植株在由于细菌性病害白叶枯导致的产量减少等问题。