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[发明专利]半乳糖基转移酶GalT基因点突变小鼠模型的构建方法及其用途-CN202010911812.7在审
发明人： 约瑟夫·弗戈迈尔;刘丽;操然 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2020-09-02 - 公布日： 2020-12-01 - 主分类号： A01K67/027 文献下载
摘要：本发明提供了一种半乳糖基转移酶GalT基因点突变小鼠模型的构建方法及其用途，包括如下步骤：（1）靶点构建：寻找半乳糖基转移酶B4GalT基因的CDS区，明确外显子部分，确定基因突变位点；（2）获取受精卵，并进行显微注射：通过体外转录的方式，获得cas9 mRNA和gRNA，通过合成获得oligo donor DNA，将cas9 mRNA、gRNA和oligo donor DNA显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，获得F0代小鼠；（3）将阳性F0代小鼠和C57BL/6J配繁后，得到具有B4GalT基因定点突变的阳性F1代杂合子；（4）阳性杂合子小鼠交配后经PCR测序确认获得阳性纯合子，表明小鼠模型构建成功。本发明模型制作简单，重复性好，可用于人类糖基化异常疾病的药物的研究，对探求治疗方法有重要的实际意义。
半乳糖转移酶 galt 基因突变小鼠模型构建方法及其用途

[发明专利]β-半乳糖苷酶融合蛋白及其制备方法与用途-CN202010910370.4在审
发明人：韩媛媛;刘丽;约瑟夫·弗戈迈尔 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2020-09-02 - 公布日： 2020-11-27 - 主分类号： C12N9/38 文献下载
摘要：本发明提供了一种β‑半乳糖苷酶融合蛋白及其制备方法与用途，通过使用柔性肽接头连接两个β‑半乳糖苷酶催化亚基刚性单元，使其在大肠杆菌原核系统中成功高效地异源表达出有活性的重组蛋白；本发明在二聚体间插入Linker的方法基于基因克隆、重组手段，具有操作便捷、经济成本低且重复性高等优点。
半乳糖融合蛋白及其制备方法用途

[发明专利]一种新型单糖荧光衍生方法和应用-CN201410083915.3有效
发明人： 约瑟夫·弗戈迈尔;刘丽;蔡志鹏;安德鲁·黑根 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2014-03-07 - 公布日： 2017-06-06 - 主分类号： C07D405/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种新型单糖荧光衍生方法和应用，本发明的式（I）所示的非荧光化合物可以应用于还原糖的荧光衍生试剂方面，其中Ar为芳基或杂芳基。本发明所使用的荧光衍生试剂不具有荧光特性，与还原糖发生化学反应后能够使糖具有荧光特性，因此反应后无须去除多余的衍生物从而可以快速地进行HPLC分析，此外，此方法中衍生物能够与糖进行分子量11的反应从而实现对糖的定量分析。
一种新型单糖荧光衍生方法应用

[发明专利]一种可同时提取糖链的装置-CN201410529820.X有效
发明人： 约瑟夫·弗戈迈尔;刘丽;王毛毛;段旭初 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2014-10-09 - 公布日： 2014-12-24 - 主分类号： G01N1/28 文献下载
摘要：本发明公开了一种可同时提取糖链的装置，包括支架、左拐角主体、右拐角主体、船型主体、半透膜、密封垫片、长软管和短软管，所述的左拐角主体和右拐角主体架设在支架上，所述的左拐角主体和右拐角主体设有相对应的孔，相对应的两个孔通过长软管和短软管连通；在所述的左拐角主体上底面设有船型主体，所述的船型主体设有与左拐角主体相对应的孔，在左拐角主体与船型主体之间设有半透膜，在半透膜的上下底面分别设有密封垫片。本发明结构合理，实用方便，简化了操作，能够同一时间处理多个相同或不同种类样品，每个孔的柱体积可保持一致，这样使得样品所含组分能够在基本一致的时间内得到分离并收集，尤其对于平行样品可消除偶然误差。
一种同时提取装置

[发明专利]一种定向突变的半乳糖基转移酶的应用-CN201410027426.6有效
发明人： 约瑟夫·弗戈迈尔;刘丽;陈欢 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2014-01-21 - 公布日： 2014-06-11 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种定向突变的半乳糖基转移酶的应用。本发明经过研究发现定向突变的半乳糖基转移酶1能够从野生型的转移半乳糖变为基本只转移乙酰氨基半乳糖，并非如现有技术中报道的突变后的β1,4-半乳糖基转移酶1将同时转移半乳糖和乙酰氨基半乳糖，并且两者的转移效率相接近都为50%，有很大的区别。因此，定向突变的半乳糖基转移酶1可在生产不含乳糖或极低乳糖含量的天然奶中的应用。突变后的半乳糖基转移酶1从转移半乳糖变为转移乙酰氨基半乳糖，所以改变了乳汁中的乳糖成分，使其成为一种乳糖类似物，所以通过突变育种技术突变哺乳动物的半乳糖基转移酶1基因可以生产出几乎不含乳糖的新型奶，即可避免乳糖不耐症的发生。
一种定向突变半乳糖转移酶应用

[实用新型]一种可同时进行多个样品操作的层析柱-CN201320507900.6有效
发明人： 约瑟夫·弗戈迈尔;刘丽;王婷 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2013-08-20 - 公布日： 2014-02-26 - 主分类号： B01D15/22 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种可同时进行多个样品操作的层析柱，包括若干根长管。该层析柱还包括立柱及固接在立柱上的上支架和下支架；所述长管夹装在上、下支架上；在长管的顶部设有一个顶盖；顶盖上部设有一个进液口，下部设有多个与进液口相连通且与长管相对应的分液管；所述分液管紧密的嵌装在长管内；每根长管的下端设有过滤器，并套装有出液管。本实用新型结构合理，实用方便，能够使层析流动相均匀分配至每一个柱体并保持流速一致，这样使得样品所含组分能够在基本一致的时间内得到分离和收集，简化了操作，提高了效率。
一种同时进行样品操作层析

[实用新型]一种适用于96孔细胞培养板的层析柱-CN201320507899.7有效
发明人： 约瑟夫·弗戈迈尔;刘丽;王婷 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2013-08-20 - 公布日： 2014-02-26 - 主分类号： B01D15/22 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种适用于96孔细胞培养板的层析柱，包括架体和多根长管。所述架体包括立柱及固接在立柱上的上支架和下支架；所述长管竖直的夹装在上、下支架上；在长管的顶部设有一个顶盖；顶盖上部设有一个进液口，下部设有多个与进液口相连通且与长管相对应的分液管；所述分液管紧密的嵌装在长管内；每根长管的下端设有过滤器，并套装有出液管；所述下支架的下方设有一底座。本实用新型结构合理，实用方便，能够使层析流动相均匀分配至每一个柱体并保持流速一致，这样使得样品所含组分能够在基本一致的时间内得到分离并收集到细胞培养板的板孔内，简化了操作。
一种适用于 96 细胞培养层析