本发明公开了对类胡萝卜素具有高亲和性的核酸适配体及其应用,属于类胡萝卜素检测技术领域。所述对类胡萝卜素具有高亲和性的核酸适配体,为两段裂开型适配体TF‑2A、TF‑2B,其核苷酸序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示。或为两段裂开型适配体β5‑2A、β5‑2B,其核苷酸序列如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示。所述对类胡萝卜素具有高亲和性的核酸适配体在检测、分离、富集类胡萝卜素中的应用。本发明通过对原适配体β‑5裂开、二倍嵌合,然后进行末端锁定的改造方式,得到了对靶标具有更高亲和力的适配体,对实现类胡萝卜素的检测、分离、富集具有重要意义。