本发明提供伪狂犬病病毒基因工程弱毒疫苗株及其应用,属于动物医学疫苗领域。所述疫苗株,是将伪狂犬病病毒Bartha K61株基因组中的gC基因替换为伪狂犬病病毒AH02LA株的gC基因、gD基因替换为伪狂犬病病毒AH02LA株的gD基因后获得的,所述伪狂犬病病毒AH02LA株的gC基因序列如SEQ ID No:1所示,所述伪狂犬病病毒AH02LA株的gD基因序列如SEQ ID No:2所示。本发明疫苗株能够很好的适应ST细胞,滴度高,安全性较高;以该疫苗株为有效成分的疫苗免疫后能够对免疫猪只提供100%保护,该疫苗不但能阻止发病,还能显著降低排毒率、大幅减少排毒量,排毒时间大大缩短。