本发明公开了抗基质金属蛋白酶3的单克隆抗体及其制备和应用,所述单克隆抗体为兔单克隆抗体A或兔单克隆抗体B,兔单克隆抗体A的重链CDR区氨基酸序列如SEQ ID NO.1~3所示且其轻链CDR区氨基酸序列如SEQ ID NO.4~6所示,兔单克隆抗体B的重链CDR区氨基酸序列如SEQ ID NO.7~9所示且其轻链CDR区氨基酸序列如SEQ ID NO.10~12所示;兔单克隆抗体A和兔单克隆抗体B可以用于开发双抗夹心法酶联免疫检测试剂盒,具有检测灵敏度高、稳定性好等优点;而且本发明通过单B细胞克隆技术生产兔单克隆抗体A和兔单克隆抗体B,成本更为低廉,生产更易放大,具有更高的推广价值。