本发明提供了表现出高活性的2‑OST突变体。具体地,本发明提供了2‑O‑硫酸化酶突变体,其在以下的任何一种氨基酸序列中具有由碱性氨基酸残基对位置321处的亮氨酸残基的取代:(a)SEQ ID NO:2的氨基酸序列;(b)氨基酸序列,其在SEQ ID NO:2的氨基酸序列中包含一个或几个氨基酸取代、缺失、插入或添加;或(c)氨基酸序列,其与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有90%或更多的同一性;或(d)氨基酸序列,其由SEQ ID NO:2的氨基酸序列中位置69至356处的氨基酸残基组成;(e)氨基酸序列,其在由SEQ ID NO:2的氨基酸序列中位置69至356处的氨基酸残基组成的氨基酸序列中包含一个或几个氨基酸取代、缺失、插入或添加;或(f)氨基酸序列,其与由SEQ ID NO:2的氨基酸序列中位置69至356处的氨基酸残基组成的氨基酸序列具有90%或更多的同一性;并且具有2‑O‑硫酸转移活性。