本发明提供了一系列新的引物及核酸融合分子，其中包括SEQ ID NO.3的norB‑up‑F、SEQ ID NO.4的norB‑up‑R、SEQ ID NO.5的norB‑down‑F、SEQ IDNO.6的norB‑down‑R、SEQ ID NO.7的融合分子。本发明还公开了所述核酸的PCR方法，以及其用于敲除金葡菌norB基因的用途。本发明独辟蹊径，通过反复探索，选定利用norB基因上下游特定长度片段作为敲除工具，设计引物、PCR方法，最终成功实现了norB敲除。
本发明涉及一种敲除毒力相关基因Ms esat‑6的重组耻垢分枝杆菌菌株，简称rMs‑ΔE6，其保藏编号为：CCTCC M 2021462。本发明还涉及上述重组耻垢分枝杆菌rMs‑ΔE6用于预防和/或治疗结核病的疫苗及制剂中的应用。rMs‑ΔE6菌株在巨噬细胞中存活率降低，且rMs‑ΔE6诱导的免疫应答对Mtb感染的保护作用高于Ms。因此，rMs‑ΔE6不仅可作为更安全的疫苗载体，用于预防或治疗性疫苗的载体；还具有诱导抗Mtb保护性免疫应答的特性，可用于免疫治疗剂的研制，因而具有良好的应用前景。
