本发明公开了一种基于CRISPR的大肠杆菌ST131系菌株检测引物、试剂盒及检测方法,属于分子生物学技术领域。该引物针对CRISPR3位点基因序列或者与该序列同源性达95%以上的同源序列设计合成,具体见序列表中SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2。本发明中检测方法以待测样本基因组DNA或单菌落为模板,利用上述引物进行PCR扩增,扩增产物与阳性对照有相同条带的判定为疑似阳性,回收疑似阳性的扩增产物,进行测序分析,检测出SEQ ID NO.4所示序列的判定为大肠杆菌ST131系菌株阳性。该检测方法操作简单,灵敏度高,特异性好,检测结果准确、可靠。
本发明公开了一种基于特异序列的大肠杆菌和志贺菌检测引物、试剂盒及检测方法,属于分子生物学技术领域。该引物针对大肠杆菌和志贺菌共同的一段特异序列(如SEQ ID NO.3所示)或其同源性达96%以上的同源序列设计合成,具体如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示。本发明中检测方法以待测样本基因组DNA或单菌落为模板,利用上述引物进行PCR扩增,扩增产物与阳性对照有相同条带的判定为疑似阳性,回收疑似阳性的扩增产物,进行测序分析,与SEQ ID NO.3所示序列相同或同源性达96%以上的判定为大肠杆菌、志贺菌阳性。该检测方法操作简单,敏感性和特异性高,与大肠杆菌、志贺菌的种属结果一致,检测费用低,具有良好的推广应用价值。