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[发明专利]一种以异种动物间的卵母细胞为介质获得雄原核的方法-CN201910973104.3有效
发明人：张立苹;林郑云;郑新民;毕延震;华再东;肖红卫;任红艳;华文君 -专利权人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2019-10-14 - 公布日： 2021-07-20 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明涉及胚胎工程的技术领域，具体涉及一种以异种动物间的卵母细胞为介质获得雄原核的方法，包括以下步骤：步骤1、获取带有第一极体的动物A的成熟卵母细胞并置于动物B的体外受精液微滴中；步骤2、将所述动物B的精子注入步骤1中的含有所述卵母细胞的体外受精液微滴中，获得精卵混合微滴；步骤3、将步骤2得到的精卵混合微滴置于CO2培养箱中孵育，至所述动物B的精子进入所述卵母细胞的细胞质形成雄原核；其中，所述动物A和动物B为异种动物。本发明的方法中，利用异种动物不交叉受精的生殖隔离的受精生物学原理，运用体外受精的方法以异种动物的卵母细胞作为介质来获得另一动物的雄原核，雄原核的形成率高达17.8％以上。
一种动物细胞介质获得雄原核方法

[发明专利]一种猪单胚胎体外培养方法-CN201810426299.5有效
发明人：张立苹;林郑云;毕延震;华再东;郑新民 -专利权人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2018-05-07 - 公布日： 2021-01-22 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪单胚胎体外培养方法。属于农业‑畜牧兽医领域。具体为采用饲养层细胞微滴与单个胚胎进行共培养，获得了较好的发育结果，单胚胎培养与传统所用的多胚胎培养发育进程是一致的，而且，带透明带附着或去透明带的单胚胎7天均可获得猪孤雌发育囊胚。本发明中提供的饲养层细胞微滴制备简单，按照本发明中提供的方法能够为研究单个胚胎的发育提供可靠的原始材料，完全可以满足对猪单个胚胎发育进程跟踪观察及进一步研究的需要。本发明中提供的单胚胎培养方法可广泛应用于多种物种的单胚胎培养中。
种猪胚胎体外培养方法

[发明专利]一种奶牛与黄牛异种体外受精胚胎的制备方法-CN201710667052.8有效
发明人：张立苹;林郑云;郑新民;毕延震;华再东;曹辉;刘西梅;肖红卫;华文君;李莉 -专利权人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2017-08-07 - 公布日： 2020-02-14 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明公开了一种奶牛与黄牛体外受精胚胎的制备方法。方法中采用屠宰场废弃的奶牛卵巢，经过温度递增式的生理盐水梯度洗涤，抽取其中的卵母细胞进行体外成熟培养，获得高质量的体外成熟培养的卵母细胞；高产奶牛精子解冻后置入受精液中用移液枪轻轻吹打后，上下颠倒几次，于培养箱中上浮，进行体外受精，制备高产奶牛与黄牛体外受精胚胎。本发明采用屠宰场废弃的卵巢获得卵母细胞，提高了母牛资源的利用率。并且通过技术细节的改进，获得了较好的效果。利用本发明能够大幅度提高优良种公畜的利用率，使优良种公畜获得大量的后代，从而扩大其在畜群遗传改良中的作用。
卵母细胞体外成熟培养体外受精胚胎卵巢高产奶牛屠宰场制备黄牛废弃奶牛技术细节生理盐水体外受精温度递增遗传改良培养箱移液枪吹打精液后置精子母牛上浮解冻洗涤颠倒抽取后代改进

[实用新型]一种猕猴精子冷冻装置-CN201820026774.5有效
发明人：张立苹;孙理华;林郑云;牛敏杰;肖红卫;毕延震;华文君 -专利权人：湖北天勤生物科技有限公司
申请日： 2018-01-08 - 公布日： 2018-12-25 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种猕猴精子冷冻装置，包括活动连接有箱盖的箱体，所述箱体底部设置有底板，底板中间旋转连接有第二齿轮，底板四角固定有轴承，轴承的内圈同心连接有第一齿轮，第一齿轮与第二齿轮啮合；第一齿轮中心固定有支柱，支柱上穿有与支柱相对应孔位的支撑板，支撑板的开孔处内嵌有螺纹套，支柱表面设置有与螺纹套配合的螺纹；所述底板一端旋转连接有调节杆，所述调节杆通过传动带与第二齿轮传动连接，调节杆的顶部贯穿箱盖并延伸至箱盖的外部。本实用新型积小、结构简单、易于携带，可精确把控精子在液氮上方的高度，实现了在密封状态下调节猕猴精子的高度，减少液氮损失，用于现场临床上的动物精子冷冻。
底板调节杆猕猴齿轮箱盖精子冷冻装置本实用新型旋转连接螺纹套支撑板精子液氮轴承齿轮传动连接活动连接有齿轮啮合齿轮中心底板四角动物精子密封状态同心连接支柱表面传动带开孔处螺纹孔位内嵌内圈冷冻携带贯穿外部延伸配合

[发明专利]一种高产奶牛卵裂球重构胚胎的制备方法-CN201810241051.1在审
发明人：张立苹;林郑云;郑新民;毕延震;刘西梅;肖红卫;华再东;华文君;曹辉 -专利权人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2018-03-22 - 公布日： 2018-08-21 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：本发明公开了一种高产奶牛卵裂球重构胚胎的制备方法，属于胚胎学领域。本方法具体如下：1、制备体外成熟奶牛卵母细胞；2、解冻高产奶牛冷冻精子；3、制备32细胞期以上高产奶牛体外受精胚胎；4、采用piezo操作系统构建高产奶牛胚胎卵裂球重构胚胎；5、重构胚胎体外培养。本发明通过使用piezo操作系统制备高产奶牛胚胎卵裂球重构胚胎，取代现有技术中使用激光破膜仪或者斜口针制备重构胚胎的步骤，piezo操作系统将电压效应产生的脉冲经由显微注射针头直接作用于欲注射的细胞表面，大大减少了对胚胎的损伤，提高了重构胚胎的存活率。
胚胎重构高产奶牛制备卵裂球操作系统胚胎体外培养体外受精胚胎显微注射针头电压效应冷冻精子卵母细胞体外成熟细胞表面存活率细胞期斜口针脉冲构建破膜解冻激光奶牛损伤注射