本发明提供了一种互换HA和NS1缺失基因包装信号的H9N2亚型禽流感病毒及其构建方法和应用，属于疫苗技术领域。一种互换HA和NS1缺失基因包装信号的H9N2亚型禽流感病毒，包括重组NS‑HAmut‑NS和HA‑NS1‑128mut‑HA基因。所述重组NS‑HAmut‑NS和HA‑NS1‑128mut‑HA基因的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。利用本发明所述基因构建得到的重组H9N2亚型禽流感病毒能有效避免HA和NS片段与野生毒株发生重配，且具有减毒特性和良好的攻毒保护效力。
本发明提供一种猪细小病毒、猪流行性腹泻、大肠埃希氏菌三联疫苗，包含有抗原和疫苗佐剂，其中抗原是由保藏编号为CCTCC M 2016098的X33‑VP2菌株表达的猪细小病毒VP2蛋白；保藏编号为CGMCC No.8503的猪流行性腹泻病毒和大肠埃希氏菌K88、K99、987P的纤毛抗原。本发明的猪细小病毒、猪流行性腹泻和大肠埃希氏菌三联疫苗免疫原性好，免疫后抗体产生快，产生的抗体滴度高且维持时间长，保存期长，免疫剂量小，选用的佐剂易于注射，可一针防治三种疾病，在配种前进行免疫注射可使怀孕母猪所产仔猪获得较好的被动免疫，使仔猪产生坚强的免疫力，能够抵抗强毒的攻击，提高仔猪的存活率。
本发明提供一种兔病毒性出血症病毒的病毒样颗粒及其制备方法，所提供的病毒样颗粒，是重组杆状病毒感染昆虫细胞后，培养收集获得的；所述的重组杆状病毒，其中包含有编码VP60蛋白的核苷酸片段；所述的VP60蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:4。本发明还提供一种兔病毒性出血症病毒亚单位疫苗，包括有抗原和疫苗佐剂，其所用的抗原为本发明制备的病毒样颗粒。VLP在空间构想上更类似与天然病毒，可同时刺激机体产生细胞免疫和体液免疫，免疫效果好，且由于VLP不含有病毒核酸，不存在潜在的病毒致病基因，安全性更高。
本发明公开了一种特异性检测TW I型传染性支气管炎病毒的反转录‑实时荧光定量PCR试剂盒及其应用。所述的试剂盒中至少含有两套引物和探针之一，其中第一套检测引物如SEQ ID NO.8－9所示，探针序列如SEQ ID NO.10所示，所述荧光探针5和3’端分别标记6‑FAM基团和MGB基团；第二套检测引物如SEQ ID NO.11－12所示，探针序列如SEQ ID NO.13所示，所述荧光探针5和3’端分别标记6‑FAM基团和MGB基团。本发明的试剂盒敏感性高，特异性好，重复性好，能特异性检测TW I型IBV，对于TW I型IBV临床病例快速鉴别诊断和流行病学监测具有重要意义。
本发明提供一种新城疫、禽流感、法氏囊和禽腺病毒四联疫苗，包含有抗原和疫苗佐剂，其中抗原是新城疫Lasota病毒株,保藏编号为CCTCC NO:V201517的H9亚型禽流感病毒株、由法氏囊VP2蛋白和氨基酸序列为SEQ ID NO:2的禽腺病毒Hexon蛋白和鸡α‑干扰素蛋白。本发明将新城疫Lasota病毒株、H9亚型禽流感病毒QDY株、法氏囊VP2蛋白、禽腺病毒Hexon蛋白、和鸡α‑干扰素蛋白抗原液按比例混合后，加油佐剂混合乳化制成疫苗。本发明制备的疫苗能提高免疫后的抗体水平，提高免疫后抗体的整齐度，保证了疫苗的免疫效果，此疫苗具有高效、安全性好的优点。
本发明提供一种兔支气管败血波氏杆菌亚单位疫苗，具体涉及分离培养及Bb基因特异性引物PCR扩增和测序鉴定一种兔支气管败血波氏杆菌(QDBb01株，保藏号为CCTCC M 2016607)，通过对该兔支气管败血波氏杆菌外膜蛋白(OMP)的提取及纯化出蛋白分子量＞40kDa的抗原蛋白，然后采用Bradford蛋白含量测定法测出蛋白浓度并稀释至150ug/ml，再与氢氧化铝胶佐剂按照体积比1:4乳化制备出亚单位疫苗(成品相当于30ug/ml)，按照1ml/只剂量皮下注射免疫体重1.5kg左右的家兔，免后14日，用兔支气管败血波氏杆菌QDBb01株(LD50为4.8×105CFU)按照100LD50进行耳静脉注射攻毒，攻毒后观察7日，统计家兔的攻毒保护率为10/10。
本发明提供一种生产B型禽偏肺病毒F蛋白的重组菌株及其应用，本发明提供的生产B型禽偏肺病毒F蛋白的基因工程毕赤酵母菌，其保藏编号为CCTCC M 2016097。本发明构建了带有人工设计改造后的B型禽偏肺病毒F蛋白基因的高效表达载体，获得了在毕赤酵母菌中高效表达B型禽偏肺病毒F蛋白的重组菌株，该表达产物为可溶性蛋白。这为工业化生产B型禽偏肺病毒亚单位疫苗奠定了坚实的基础。
