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[发明专利]一种磁性阴离子交换剂及其作为内毒素吸附介质的应用-CN201110238149.X有效
发明人： 应国清;来灿林;易喻;梅建凤;王鸿;陈建澍;姜玉奇 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2011-08-18 - 公布日： 2012-04-25 - 主分类号： B01J41/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种磁性阴离子交换剂及其作为内毒素吸附介质的应用，所述的磁性阴离子交换剂的制备方法包括如下步骤：(1)先将磁性材料分散在含有壳聚糖的乙酸溶液中，再将所得的水相I转移至含有司盘80的液体石蜡中，以甲醛和环氧氯丙烷为交联剂，采用反相悬浮法制得磁性壳聚糖微球；(2)将步骤(1)所得磁性壳聚糖微球先后用HCl和NaOH溶液浸泡，抽滤后用乙醇洗涤、干燥即得交联磁性壳聚糖微球，即磁性阴离子交换剂。该磁性阴离子交换剂不仅对于内毒素具有较高的去除率，并且对蛋白质的保留率也较高，磁性材料的引入也使其操作起来更为方便，也适于大量生物制品中内毒素的去除。
一种磁性阴离子交换及其作为内毒素吸附介质应用

[发明专利]一种抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体片段的制备方法-CN201110403007.4无效
发明人： 应国清;李慧娟;王鸿;易喻;梅建凤;陈建澍 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2011-12-07 - 公布日： 2012-04-18 - 主分类号： C12P21/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体片段的制备方法：将活化的固定化木瓜蛋白酶于pH5.00.1mol/L醋酸缓冲液中，加入抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体，30～60℃水浴反应4～24h，反应液抽滤，滤饼B为固定化木瓜蛋白酶回收利用，滤液B即为含单克隆抗体片段的水解液，采用弱阴离子交换层析对含单克隆抗体片段的水解液进行分离纯化，获得所述抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体片段；本发明方法操作简便、纯化步骤少、所得抗体片段纯度高；本发明中制备的抗体片段只需经过一步纯化就可达到90％以上的纯度。
一种绒毛促性腺激素单克隆抗体片段制备方法

[发明专利]一种基于磁性壳聚糖微球的内毒素吸附介质及其使用方法-CN201110182649.6无效
发明人： 应国清;来灿林;易喻;梅建凤;王鸿;陈建澍;姜玉奇 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2011-06-30 - 公布日： 2012-02-15 - 主分类号： B01J20/24 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于磁性壳聚糖微球的内毒素吸附介质及其使用方法，所述的内毒素吸附介质的制备方法包括如下步骤：(1)先将磁性材料分散在乙酸溶液中，加入壳聚糖配成水相I，再将该水相I转移至含有司盘80的液体石蜡中，以戊二醛为交联剂，采用反相悬浮法制得磁性壳聚糖微球；(2)将磁性壳聚糖微球分散到二甲基亚砜与氢氧化钠的混合溶液中，再加入环氧氯丙烷活化，去离子水洗涤至中性，得到活化后产物；(3)将活化后产物置于内毒素亲和配基溶液中固载，即得到所述的基于磁性壳聚糖微球的内毒素吸附介质。本发明的内毒素吸附介质不但对于内毒素具有较高的选择性，而且操作简便，可用于大量生物制品中内毒素的去除。
一种基于磁性聚糖内毒素吸附介质及其使用方法

[发明专利]SA/NaCS-PDMDAAC微胶囊、固定化酵母细胞及其应用-CN201110034448.1无效
发明人： 应国清;张杨;易喻;梅建凤;王鸿 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2011-01-31 - 公布日： 2011-09-07 - 主分类号： B01J13/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种SA/NaCS-PDMDAAC微胶囊、固定化酵母细胞及其应用。本发明采用聚电解质成膜原理，以海藻酸钠(SA)和NaCS为聚阴离子，聚二甲基二烯丙基氯化铵(PDMDAAC)为聚阳离子，两者通过界面络合反应得到一层半透膜的中空微胶囊。另外通过酵母与聚阴离子混合滴入聚阳离子中制备固定化酵母细胞。然后以胞苷一磷酸为底物，利用固定化酵母生物转化胞苷三磷酸，转化率可达80％以上。
sa nacs pdmdaac 微胶囊固定酵母细胞及其应用

[发明专利]一株海洋来源真菌及其应用-CN201010607944.7有效
发明人：王鸿;钱镒娜;虞锦芬;应国清;易喻;梅建凤;陈建澍 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2010-12-27 - 公布日： 2011-08-31 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明提供了一株海洋来源真菌——青霉属(Penicillium sp.)ENP701，及其在微生物发酵制备喹啉生物碱的二聚物盐中的应用。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，430072，保藏编号：CCTCC No：M2010088，保藏日期：2010年4月19日。本发明的有益效果主要体现在：提供了一株能够产生具有抗肿瘤活性的喹啉生物碱二聚物盐的海洋来源真菌，并对其发酵条件进行了优化，为新药研发提供了基础。
海洋来源真菌及其应用

[发明专利]一种抗氯霉素单克隆抗体及其应用-CN201010618725.9有效
发明人： 应国清;汪竹环;易喻;梅建凤;陈建澍;王鸿 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2011-04-06 - 公布日： 2011-08-10 - 主分类号： C07K16/44 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗氯霉素单克隆抗体，所述单克隆抗体对氯霉素有特异性，所述抗单克隆抗体由保藏编号为CCTCC C2010110的细胞株分泌产生。本发明提供的抗氯霉素单克隆抗体可应用于检测氯霉素残留量。本发明还提供一种检测氯霉素残留量的试剂盒，所述试剂盒含有本发明提供的抗氯霉素单克隆抗体。本发明提供的抗氯霉素单克隆抗体的质量具有很强的可控性和可重复性。并通过对所得抗体特性的初步分析及鉴定，为特异、灵敏的CAP免疫测定方法的进一步建立和应用提供了实验依据。
一种氯霉素单克隆抗体及其应用

[发明专利]一种用活性炭提取琼胶水解液中寡糖的方法-CN201010587643.2无效
发明人： 应国清;邵锦挺;梅建凤;王鸿;易喻;陈建澍 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2010-12-14 - 公布日： 2011-07-20 - 主分类号： C12P19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种用活性炭提取琼胶水解液中寡糖的方法，包括如下步骤：(1)配制0.0001～0.1g/mL的琼胶水溶液，加入酶液或酸，30～50℃水浴保温2～8h，灭酶活或加碱中和，离心去沉淀得琼胶水解液；(2)于琼胶水解液中加入活性炭并不断搅拌，每100ml溶液加入5～20g活性炭，搅拌吸附30～120min后抽滤，得到吸附了寡糖的活性炭；(3)将体积分数为1％～100％的醇溶液加入到吸附了寡糖的活性炭中搅拌洗脱30～120min，每10g吸附了寡糖的活性炭加入醇溶液10～200ml，抽滤，将滤液浓缩干燥后即得琼胶寡糖。本发明可以有效减少盐类杂质对提取工艺的影响，极大地简化了操作，降低了成本，适宜规模化生产。
一种活性炭提取胶水解液中寡糖方法

[发明专利]一种氯霉素人工免疫原的制备方法-CN201010586020.3无效
发明人： 应国清;叶胡明;易喻;陈建澍;梅建凤;王鸿;汪竹环 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2010-12-14 - 公布日： 2011-06-15 - 主分类号： C07K14/435 文献下载
摘要：本发明公开了一种氯霉素人工免疫原的制备方法：氯霉素溶于乙醇，调pH值为1~2，加入锌粉，50℃~70℃温度下反应，离心取上清液；然后在0~5℃温度下，调pH值为1~2，滴加NaNO2溶液，使淀粉碘化钾试纸变灰蓝，再滴加尿素溶液，使淀粉碘化钾试纸变浅蓝；再调pH值为7~9，得清液作为溶液A备用；牛血清蛋白、鸡卵清蛋白或人血清蛋白溶于pH值7.4，浓度为0.01M磷酸缓冲液中，作为溶液B；在0~5℃温度下，将溶液A滴入溶液B中，同时滴加NaOH溶液保持pH值为7~9，滴完后在0~5℃下反应6~24小时，经透析、冷冻干燥得到所述氯霉素人工免疫原。本发明使用无毒或低毒试剂，流程简单，副反应少，生产效率高，有利于企业批量生产。
一种氯霉素人工免疫原制备方法

[发明专利]一种喹啉生物碱的二聚物盐及其制备和应用-CN201010607819.6有效
发明人：王鸿;沈丽丽;应国清;倪建良 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2010-12-27 - 公布日： 2011-05-25 - 主分类号： C07F3/02 文献下载
摘要：本发明公开了喹啉生物碱的二聚物盐，即3-仲-丁基-4-甲基-2，3-二氢-1H-吡咯并[3，4-b]喹啉-1，9(4H)-二酮的二聚物盐，该喹啉生物碱的二聚物盐的制备方法是将海洋来源真菌Penicillium sp.CCTCC No：M2010088用人工海水GYT培养基培养后所得菌体用甲醇浸提制备提取物，用200～300目柱层析硅胶进行柱层析分离，以体积比为10～0∶1的氯仿/甲醇进行梯度洗脱，收集Rf为0.5的组份，用甲醇进行重结晶，得到所述的喹啉生物碱的二聚物盐。所述喹啉生物碱的二聚物盐具有显著的抗肿瘤作用，体外对人肺癌细胞H460半抑制率浓度为19.38±0.15μg/ml，可能是潜在的抗肿瘤药物。
一种喹啉生物碱二聚物盐及其制备应用

[发明专利]一种适于蛋白纯化的壳聚糖分离介质的制备方法-CN201010579423.5有效
发明人： 应国清;崔国艳;易喻;王鸿;梅建凤;陈建澍 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2010-12-09 - 公布日： 2011-05-25 - 主分类号： B01J20/24 文献下载
摘要：一种适于蛋白纯化的壳聚糖分离介质的制备方法，包括如下步骤：(1)在搅拌下，将壳聚糖的乙酸溶液分散于液体石蜡中，在制孔剂环己烷和少许span 80存在下，形成壳聚糖微粒；然后在交联剂戊二醛的作用下，壳聚糖微粒进一步交联形成壳聚糖骨架；(2)壳聚糖骨架先进行溶胀处理；然后在DMSO/NaOH混合液中，壳聚糖骨架上的羟基与环氧氯丙烷反应，在壳聚糖骨架上引入环氧基，得到接枝后的壳聚糖骨架；(3)将IDA/NaOH混合溶液加入接枝后的壳聚糖骨架，20～80℃温度下反应1～10h，抽滤即得所述的壳聚糖分离介质。本发明所述的壳聚糖分离介质在很大程度上解决了金属离子泄露的问题，具有工艺稳定性及重现性好等优点，适宜规模化生产。
一种适于蛋白纯化聚糖分离介质制备方法

[发明专利]一种壳聚糖强酸性离子交换介质的制备方法-CN201010567786.7有效
发明人： 应国清;孙洋;易喻;王鸿;梅建凤;陈建澍 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2010-11-30 - 公布日： 2011-04-20 - 主分类号： B01J39/18 文献下载
摘要：一种壳聚糖强酸性离子交换介质的制备方法，包括如下步骤：(1)在搅拌下，将壳聚糖的乙酸溶液分散于液体石蜡中，在乳化剂span 80存在下，形成壳聚糖微粒；然后在交联剂戊二醛的作用下，壳聚糖微粒进一步交联形成壳聚糖珠体骨架；(2)壳聚糖珠体骨架上的羟基与环氧氯丙烷反应，在壳聚糖珠体骨架上引入环氧基，得到活化后的壳聚糖珠体骨架；(3)活化后的壳聚糖珠体骨架中加入亚硫酸氢钠和水溶剂，于30～80℃反应1h～72h，结束反应后洗涤干净，加入盐酸进行转型，即得到目标产物。本发明制得的强酸性离子交换介质具有较好的生物相容性、机械性能优良，耐酸碱性好和较高的离子交换容量。
一种聚糖酸性离子交换介质制备方法

[发明专利]利用表面活性剂从柳叶腊梅中提取香豆素类化合物的方法-CN201010567760.2无效
发明人：王鸿;杨春;应国清;程文亮 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2010-11-30 - 公布日： 2011-04-20 - 主分类号： C07D311/16 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用表面活性剂从柳叶腊梅中提取香豆素类化合物的方法，包括以下步骤：(1)在柳叶腊梅枝干粉碎物中加入表面活性剂的水溶液，所述水溶液中表面活性剂的含量为10mg/ml-30mg/ml，所述表面活性剂的水溶液的加入量为每g柳叶腊梅枝干粉碎物加入10ml-40ml；(2)将步骤(1)所得混合溶液进行超声辅助处理；(3)对超声处理后的混合溶液过滤处理，获得含有香豆素类化合物的溶液。本发明操作简单方便，提取时间短，提取效率高，结果显著，提取率比传统的纯水提取率高200％～500％。
利用表面活性剂柳叶腊梅提取香豆素类化合物方法

[发明专利]一种应用高速逆流色谱分离香豆素类化合物的方法-CN201010522046.1有效
发明人：王鸿;杨春;应国清;易喻;梅建凤;程文亮 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2010-10-27 - 公布日： 2011-04-13 - 主分类号： C07D311/16 文献下载
摘要：本发明公开了一种应用高速逆流色谱分离香豆素类化合物的方法：取正庚烷、乙酸乙酯、甲醇、水混合充分后静置分层，取上相为流动相，下相为固定相，取柳叶腊梅的初提物溶于下相中作为供试品，将固定相充满多层线圈分离柱，在500～1000r/min转速下，以0.1～3ml/min的流速注入流动相，以波长60～400nm的紫外检测器检测，当明显有流动相流出时，取供试品进样，同时用自动部分收集器收集流出液，HPLC检测，将与6，7-二甲氧基香豆素标准品保留时间相同且纯度大于98%的洗脱液合并，旋转蒸发仪回收溶剂，得到6，7-二甲氧基香豆素。本发明方法分离效果好，污染小，提取率高，产品纯度高，时间短，操作方便，条件固定，易于重复，从而可以进行工业化生产。
一种应用高速逆流色谱分离香豆素类化合物方法

[发明专利]镰刀菌BYB2及其在微生物发酵制备阿拉伯胶酶中的应用-CN201010259769.7有效
发明人： 应国清;梅建凤;廖青青;陈建澍;王鸿;易喻 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2010-08-23 - 公布日： 2011-03-30 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明提供了一株新的阿拉伯胶酶产生菌株——镰刀菌(Fusarium sp.)BYB2，及其在发酵制备L-阿拉伯糖中的应用。所述镰刀菌BYB2保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCCNo：M 2010087，保藏日期2010年4月19日。本发明的有益效果主要体现在：(1)本发明的镰刀菌BYB2营养要求简单、容易培养；(2)镰刀菌BYB2产生的阿拉伯胶酶为胞外酶，无需细胞破碎即可获得；(3)镰刀菌BYB2产阿拉伯胶酶活性高，在优选的发酵条件下，未经分离纯化的粗酶液活力可达231.6U/mL；(4)镰刀菌BYB2产阿拉伯胶酶水解阿拉伯胶的反应条件温和，作用时间较短，产物得率高。
镰刀 byb2 及其微生物发酵制备阿拉伯中的应用

[发明专利]新型水溶性壳聚糖衍生物及其制备和应用-CN201010522994.5有效
发明人： 应国清;熊文说;王鸿;易喻;梅建凤 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2010-10-28 - 公布日： 2011-02-16 - 主分类号： C08B37/08 文献下载
摘要：本发明公开了一种新型水溶性壳聚糖衍生物及其制备和应用，所述水溶性壳聚糖衍生物是在壳聚糖的结构单元的2位氨基上分别引入果糖和N，N-二乙基乙胺基，所述壳聚糖的分子量在0.5万到100万之间，所述水溶性壳聚糖衍生物的结构通式如下所示，n1、n2、n3、n4分别代表各自结构单元的数目，其中n1≥0，n2≥0，并且n3/(n1+n3+n4)＝0.1％-70％，n4/(n1+n3+n4)＝30％-99.9％。所述水溶性壳聚糖衍生物在水溶液中具有良好的溶解性，提高了抑菌活性的同时还具有良好的DPPH自由基清除能力。
新型水溶性聚糖衍生物及其制备应用