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[发明专利]对水稻褐飞虱高毒力的Bt毒素 Cry1Ab-loop2-P2S和工程菌-CN201210433476.5有效
发明人：张灵玲;邵恩斯;关雄;刘斯军;庄浩瀚;许碧虹;林莉;林立金 -专利权人：福建农林大学
申请日： 2012-11-05 - 公布日： 2013-04-24 - 主分类号： C12N15/32 文献下载
摘要：本发明涉及一种对水稻褐飞虱高毒力的Bt毒素Cry1Ab-loop2-P2S和工程菌。本发明以BtCry毒素作用模型Bravo模型为理论基础，利用噬菌体短肽文库展示技术筛选出可以和水稻褐飞虱中肠结合的短肽P2S；进一步，将短肽序列利用分子片段替换的方法替换Cry分子DomainⅡ的loop2序列，构建出cry1Ab-loop2-p2s毒素基因，将该基因与通用表达载体pGEX-KG连接并转化入大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21-DE3中，经过稳定性测定、结合活性测定及毒力测定，获得了能够表达对水稻褐飞虱有高毒性作用Cry1Ab-loop2-P2S毒素的工程菌1Ab-P2S(CGMCCNO：6427)。
水稻褐飞虱高毒力 bt 毒素 cry1ab loop2 p2s 工程

[发明专利]一种双链RNA的制备方法-CN201210368291.0无效
发明人：马文明;俞炎琴;庄浩瀚;钱叶青;杨劲树;杨帆;杨卫军 -专利权人：浙江大学舟山海洋研究中心
申请日： 2012-09-28 - 公布日： 2013-01-16 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种双链RNA的制备方法。现有体外制备siRNA的方法价格高，定制周期长，实验规模受限制。本发明方法首先利用PCR扩增的方法克隆目的基因分子；利用pET-T7质粒构建含有目的基因片段的表达载体；将含有基因片段插入的pET-T7表达载体转化到表达型菌株E.coliHT115中，选取含有目的载体的阳性菌落；接种于LB液体培养基中，加入IPTG诱导培养；抽提总RNA，溶解于RNaseA缓冲液变性，冷却复性，加入RNaseA酶切，去除单链RNA，纯化双链RNA，溶解沉淀，所得溶液即为纯化后的双链RNA样品。本发明制备方法简单，实施步骤快捷，操作重复性强，样品合成量不受限制。
一种 rna 制备方法

[发明专利]一种虾类胚胎的细胞核染色方法-CN201210245038.6有效
发明人：马文明;杨卫军;钱叶青;俞炎琴;杨帆;杨劲树;庄浩瀚 -专利权人：浙江大学舟山海洋研究中心
申请日： 2012-07-16 - 公布日： 2012-10-24 - 主分类号： G01N1/30 文献下载
摘要：本发明公布了一种虾类胚胎的细胞核染色方法。本发明方法首先取虾类胚胎置于3～5倍胚胎体积的A溶液中,静置分层后移除上层液相；加入2倍胚胎体积的正庚烷和4倍胚胎体积的甲醇，静置分层后移除上层溶液和中间层膜状组织；加入3～5倍胚胎体积的甲醇进行洗涤，重复洗涤3～5次；加入3～5倍胚胎体积的缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次；避光浸泡在1～2倍胚胎体积的浓度为5～10μg/ml的DAPI溶液中进行细胞核染色，静置分层后移除液相；加入3～5倍胚胎体积的磷酸缓冲液进行洗涤，重复洗涤3～5次，得到最终的胚胎。本发明操作方法简单，实施步骤快捷，染色效果清晰。
一种胚胎细胞核染色方法