一种多核苷酸,其包含以下碱基序列:(a)编码核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白与转录阻遏物的融合蛋白的碱基序列,以及(b)编码向导RNA的碱基序列,所述向导RNA靶向人DUX4基因的表达调控区中SEQ ID NO:2、3、4、20、51、68、144、148、152、162、164或167所示的连续区域,所述多核苷酸预计能够用于治疗或预防面肩肱型肌营养不良症(FSHD)。
一种预期可用于治疗或预防包括阿尔茨海默病在内的Tau蛋白病的多核苷酸,所述多核苷酸包含以下碱基序列:(a)编码核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白与转录阻遏因子的融合蛋白的碱基序列,和(b)编码指导RNA的碱基序列,所述指导RNA靶向人类MAPT基因的表达调控区中以SEQ ID NO:54、55、56、57、68、153或97所示的区域中长度为18至24个核苷酸的连续区域。
本发明旨在提供一种人类肌营养不良症(特别是MDC1A)的新的治疗方法。本发明提供了一种多核苷酸,其包含下述碱基序列:(a)编码核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白与转录激活因子的融合蛋白的碱基序列,和(b)编码靶向人类LAMA1基因的表达调控区中的下述连续区域的指导RNA的碱基序列:(i)在SEQ ID NO:15、20、25、50、56或61中阐述的连续区域,(ii)在SEQ ID NO:124中阐述的连续区域,或(iii)在SEQ ID NO:178、193或195中阐述的连续区域。
本发明提供了包含下述碱基序列的多核苷酸:(a)编码核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白与转录阻遏物的融合蛋白的碱基序列,和(b)编码向导RNA的碱基序列,所述向导RNA靶向人类DMPK基因的表达调控区中SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:129、SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:117或SEQ ID NO:119所示的区域中长度为18至24个核苷酸的连续区域,所述多核苷酸预期可用于治疗肌营养不良症。
预期可用于治疗或预防杜氏肌营养不良或贝克肌营养不良的多核苷酸,所述多核苷酸包含以下碱基序列:(a)编码核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白和转录激活子的融合蛋白的碱基序列,和(b)编码向导RNA的碱基序列,所述向导RNA靶向人肌营养相关蛋白基因的表达调节区中SEQ ID NO:104、105、135、141、153、167或172所示区域中长度为18至24个核苷酸的连续区域。
根据本发明,一种具有与向导RNA结合的能力并具有在以SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列中在第481位与第649位之间具有连续缺失区域的序列的蛋白质,其中与缺失区域相邻的氨基酸残基通过包含3至10个氨基酸残基的接头连接在一起,并且其中(i)所述缺失区域含有L1结构域(第481‑519位)的全部或一部分,(ii)所述缺失区域含有整个HNH结构域(第520‑628位),并且(iii)所述缺失区域任选地含有L2结构域(第629‑649位)的全部或一部分,所述蛋白质在维持DNA结合亲和力的同时起着小型化dSaCas9蛋白的作用。使用所述小型化dSaCas9蛋白允许将更多基因并入到载体中。
本发明提供一种在维持与向导RNA的结合能力的同时靶序列的限制得到缓解、且作为基因编辑中的工具有用的突变型SaCas9蛋白,所述突变型SaCas9蛋白是包含下述的氨基酸序列的蛋白等:在SEQ ID NO:2中782位的谷氨酸突变成赖氨酸(E782K)、800位的亮氨酸突变成精氨酸(L800R)、968位的天冬酰胺突变成精氨酸(N968R)、985位的天冬酰胺突变成丙氨酸(N985A)、991位的精氨酸突变成丙氨酸(R991A)、1021位的丙氨酸突变成丝氨酸(A1021S)、927位的苏氨酸突变成赖氨酸(T927K)、929位的赖氨酸突变成天冬酰胺(K929N)、1017位的异亮氨酸突变成苯丙氨酸(I1017F)而得到的氨基酸序列。