本发明公开了一种特异性抗4‑1BB靶点的单域抗体及其制备方法和应用,属于基因工程领域。该单域抗体包括以下方案:A.单域抗体的CDR1的氨基酸序列为SEQ ID No.2、7或12;CDR2的氨基酸序列为SEQ ID No.3、8或13;CDR3的氨基酸序列为SEQ ID No.4、9或14;B.与方案A中所述单域抗体的氨基酸序列相似度至少80%的多肽。该单域抗体与4‑1BB靶点具有较高的结合力,特异性强,性能优越,可进一步用于制备检测4‑1BB靶点的试剂或者制备用于治疗肿瘤的药物,具有很好的应用前景。