本发明公开了一种三元穿梭载体pCY，其核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示。还公开了一种构建CLBV侵染性克隆的方法：(1)提取感染CLBV植株总RNA，反转录后采用pCY‑CLBV1F、CLBV1R与CLBV2F、pCY‑CLBV2R分别进行PCR扩增，得到覆盖CLBV基因组全长的特异片段CLBV1、CLBV2；(2)用Stu I、Sma I酶切pCY；(3)TAR克隆：采用醋酸锂法将CLBV1、CLBV2和线性化pCY共转化酵母菌YPH501，通过同源重组获得CLBV全长cDNA克隆pCY‑CLBV；(4)pCY‑CLBV质粒转化农杆菌，接种柑桔或本生烟，鉴定获得CLBV侵染性克隆。
本发明公开了一种同步检测CYVCV、CTV和CTLV的实时荧光定量RT‑qRT试剂盒，包括如下3对病毒特异性RT‑qPCR引物：SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6。本发明通过一步RT‑qPCR反应可以实现CYVCV、CTV、CTLV的同步检测及病毒定量。本发明方法与常规RT‑PCR检测方法相比，提升了CYVCV、CTLV和CTV检测灵敏度100倍以上，检测时间节省3倍以上，污染几率降低30％以上，在诊断病害发生和监控病害流行及维护柑橘产业安全等方面具有良好的应用前景。
