本发明公开了检测鸡传染性支气管炎病毒抗体的多肽及其检测试剂盒。属于兽医生物技术领域。本发明采用昆虫杆状病毒内表达的鸡传染性支气管炎病毒N蛋白(BacPAK‑N重组蛋白)作为ELISA的包被抗原,其中BacPAK‑N重组蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示,采用真核表达的N蛋白抗原更接近鸡传染性支气管炎病毒内天然N蛋白的空间构象,该表达抗原具有更好、更接近天然病毒的抗原性,该方法特异性强、敏感性高,操作简单,检出率可达90%以上,且与其他抗体检测方法的符合率高,易于推广和使用。