本发明公开了一种硫酸软骨素AC外切酶的重组大肠杆菌及其构建方法和应用，属于生物技术领域。所述硫酸软骨素AC外切酶的重组大肠杆菌，是将硫酸软骨素AC外切酶ChSase AC II与pET‑12a(+)质粒连接，同时与表达分子伴侣GroES‑GroEL的表达质粒pGro7共同转入大肠杆菌宿主BL21(DE3)，使ChSase AC II与分子伴侣共表达。本发明通过分子伴侣GroES‑GroEL提升了硫酸软骨素AC外切酶在大肠杆菌中的可溶性表达水平，使胞内外酶活力分别提升至10.52U/mL和7.63U/mL。本发明所述的硫酸软骨素AC外切酶能够将硫酸软骨素降解为二糖，具有实际应用价值。
本发明公开了一种透明质酸裂解酶重组菌及应用，属于基因工程和酶工程技术领域。所述重组菌包括来源于节杆菌Arthrobacter sp.CS01的透明质酸裂解酶HylA基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，连接在其N端的甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶(GAPDH)基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，表达载体pET‑12a(+)，宿主菌株大肠杆菌BL21(DE3)。本发明获得的重组酶GAPDH‑HylA与HylA相比，比活力由19.8U/mg增加至25.7U/mg；Km由0.483mg/mL变为0.380mg/mL；最适反应pH由6变为7；最适反应温度由35℃变为45℃；增强了对底物的亲和度及热稳定性，改造后的酶更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率，且未改变其作用方式。
本发明涉及一种协氧蛋白VHb及其重组菌X33‑pPICZαA‑102C300C‑Vgb和应用，属于基因工程技术领域，协氧蛋白VHb的基因的核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示，所述协氧蛋白VHb的基因可用于提高毕赤酵母工程菌分泌褐藻胶裂解酶效率。本发明还提供所述协氧蛋白VHb的氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示。本发明还提供包括褐藻胶裂解酶基因和所述协氧蛋白VHb的基因的重组表达载体及重组菌X33‑pPICZαA‑102C300C‑Vgb，所述重组菌提高了菌体在发酵后期低氧环境中对氧气的利用率，最终提高了褐藻胶裂解酶的产量。
本发明涉及纳豆激酶重组表达载体、重组基因工程菌及应用，属于基因工程技术领域。在所述的载体的启动子之前串联有1个如SEQ ID NO.1所示的启动子，所述重组表达载体的信号肽为SEQ ID NO.15对应的核苷酸。本发明还提供含上述重组表达载体的重组基因工程菌，所述为枯草芽孢杆菌WB800。本发明还提供所述重组表达载体和重组基因工程菌在生产纳豆激酶中的应用。重组表达载体和重组基因工程菌中的纳豆激酶基因来源于纳豆芽孢杆菌Bacillus natto N2，较原始启动子和信号肽，本发明纳豆激酶的表达量从22.3FU/mL增加至247.1FU/mL。
本发明涉及一种重组抗菌肽E‑EJ97、重组表达载体、工程菌及其应用，属于基因工程及生物技术领域，所述重组抗菌肽E‑EJ97的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述重组表达载体含所述重组抗菌肽E‑EJ97的基因SEQ ID NO.3。本发明还提供了能够表达所述重组抗菌肽E‑EJ97的重组里氏木霉Tu6工程菌。本发明所述重组抗菌肽E‑EJ97对大肠杆菌、沙门氏菌及产气荚膜梭菌均有抑制作用，且具有良好的热稳定性、盐离子稳定性和消化酶稳定性，有利于其在制备饲料及饲料添加剂中的应用。
