本发明涉及病毒的分离纯化领域，具体而言，涉及一种腺相关病毒的分离纯化方法。该方法包括：a）提供层析介质，所述层析介质包括基体支持物和固定于所述基体支持物上的抗体，所述抗体的重链可变区序列和轻链可变区序列依次如SEQ ID NO:1和2所示；b）将包含腺相关病毒的液相组合物与所述层析介质共孵育以使得所述腺相关病毒与所述抗体结合；c）从所述抗体上洗脱所述腺相关病毒；其中，所述腺相关病毒选自AAV1～13中的任意一种或多种。该方法可通用性地对AAV1～13中的任意一种进行分离纯化，并且无需对AAV本身进行改造，纯化AAV更方便；纯化效率高，特异性好，几乎不与细胞内的其他蛋白发生可检测的非特异性结合。
本发明属于病毒载体领域，具体涉及一种WPRE突变体病毒载体及其应用，所述WPRE突变体病毒载体包括WPRE突变体‑03，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，其构建方法包括：S1：制备随机突变目的片段；S2：随机突变目的片段与能表达荧光蛋白的目的载体连接；S3：涂平板后流式细胞仪筛选细胞；S4：抽提筛选得到的细胞基因组，使用PCR技术扩增WPRE区域；S5：连接T载体后涂板获得克隆细胞，进行测序，得到WPRE突变体病毒载体。本发明中发明人通过大量的创新性劳动，设计并构建了一个WPRE随机点突变病毒文库，通过文库筛选发现一种新的WPRE突变体病毒载体，其对病毒包装有明显促进作用。
本发明属于基因工程领域，更具体地说，涉及HMGCR(3‑hydroxy‑3‑methylglutaryl‑CoA reductase,3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶1)基因在提高慢病毒的滴度和感染力中的应用。本发明公开了一种HMGCR基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，另外还公开了一种包括所述HMGCR基因的真核表达载体。本发明通过将pcDNA4‑HMGCR载体与慢病毒包装系统质粒共同转染细胞，能够在明显提高细胞生产的慢病毒的能力的同时大大提高了慢病毒的滴度和感染力，为基础研究和临床应用领域提供了一种新型的大规模高感染力的慢病毒包装方法。并且本发明具有操作步骤简单、成本低廉及非动物源性生产等特点。
本发明属于基因工程领域，更具体地说本发明涉及一种含有WPRE‑polyA元件的核苷酸序列tWPRE及其基因表达载体和应用。所述含有WPRE‑polyA元件的核苷酸序列tWPRE的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。所述基因表达载体包括上述的核苷酸序列tWPRE。本发明进一步改进了WPRE‑polyA元件，得到了优化元件tWPRE，同时在质粒转染和病毒感染两方面验证了tWPRE元件的有效性，在扩大载体容量的同时保证了高效的转基因表达效率和病毒感染效率，有助于AAV载体携带更多的特异性启动子和基因，扩大了AAV病毒的作用范围，为基础科研和临床研究提供了一种新的更特异且更高效的表达工具。
