本发明提供了一种用于检测男性生育力的引物、探针及其试剂盒,所述引物由正向引物和反向引物组成,正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No:1,反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No:2所示。所述探针包括四种探针,其核苷酸序列分别如SEQ ID No:3、SEQ ID No:4、SEQ ID No:5、SEQ ID No:6所示,所述四种探针的5'端标记有四种不同的报告荧光基团,3'端标记有淬灭荧光基团。所述试剂盒包括所述引物和所述探针。本发明实现了β防御素126基因双位点缺失的同时筛查,利用本发明进行检测能更真实地反映男性体内β防御素126的表达特征,可应用于男性不育诊断领域中。