本申请公开了一种丙酮酸脱羧酶突变体及其在制备α‑羟基酮类化合物中的应用，所述丙酮酸脱羧酶突变体是在如SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的野生型PDC的基础上发生部分位点突变而形成的，所述丙酮酸脱羧酶突变体能够应用于制备α‑羟基酮类化合物，底物转化率可达99.7％，目标产物的e.e值可达99.8％，相较于具有如SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的野生型PDC，所述丙酮酸脱羧酶突变体具有催化活性高、光学选择性更佳、底物耐受性更强以及热稳定性理想的优点。
本申请公开了一种单胺氧化酶的突变体及其在制备巴洛西韦中的应用，所述突变体是具有如SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的单胺氧化酶发生部分位点突变而形成的，所述部分位点为：E145、I246、Y188、E348或L314中的至少一种，所述突变体具有单胺氧化酶活性，所述突变体能够高效催化底物6,6‑二甲基‑3‑氮杂二环[3.1.0]己烷、氧化剂以及亚硫酸氢盐接触发生不对称氧化‑加成反应，生成巴洛西韦中间体(1S,5S)6,6‑二甲基‑3‑氮杂二环[3.1.0]己烷‑2‑磺酸盐，底物转化率可达99.99％，将所述突变体应用于巴洛西韦的制备工艺中有利于降低生产成本，提高产物得率。
本申请公开了一种酶催化体系、加氢酶及制备方法和应用。酶催化体系包括：用于催化底物经过还原反应生成产物的加氢酶、有机溶剂、辅酶和辅酶再生剂。加氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，或者为与SEQ ID NO：1至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％相似性的氨基酸序列。通过酶催化还原反应得到可作为依折麦布中间体的(4S)‑3‑[(5s)‑5‑(4‑氟苯基)‑5‑羟基戊酰基]‑4‑苯基‑1，3‑氧氮杂环戊烷‑2‑酮。采用本申请的加氢酶制备依折麦布中间体，酶的用量少，产物转化率高。
本申请公开了一种转氨酶及其在制备西他列汀中的应用，该转氨酶的氨基酸序列如SEQID NO：1所示，或者为与所述SEQ ID NO：1至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％相似性的氨基酸序列。该转氨酶能够不对称催化西他列汀前体酮(2Z)‑4‑氧代‑4‑[3‑(三氟甲基)‑5,6‑二氢‑[1,2,4]三唑并[4,3‑a]吡嗪‑7‑(8H)‑基]‑1‑(2,4,5‑三氟苯基)丁‑2‑酮转氨生成西他列汀中间体(3R)‑3‑氨基‑1‑[3‑(三氟甲基)‑5,6,7,8‑四氢‑1,2,4‑三唑并[4,3‑a]吡嗪‑7‑基]‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)丁‑1‑酮，转氨酶的酶活可达1100U/g，在酶催化反应进行2h时，50μL的转氨酶酶液可使底物转化率达到55％，相较于催化同一反应的现有转氨酶，本申请的转氨酶具有活性高、稳定性理想、对有机溶剂耐受性佳的优点。
